【摘要】　目的　探讨PCNA和LN在口腔鳞状细胞癌中的表达及与颈淋巴结转移之间的关系。方法　用PCNA和LN单克隆抗体ABC法行免疫组化染色。结果　PCNA阳性染色细胞分布于高分化鳞癌癌巢周围，低分化鳞癌呈密集无规则分布。LN在高分化鳞癌中多数呈纤细线状阳性表达，低分化鳞癌多数为阴性表达。结论　PCNA染色越强，其颈淋巴转移可能性越大，LN阴性表达者其颈淋巴转移率较阳性表达者为高。

　　增殖细胞核抗原(PCNA)是一种36KD核蛋白，是DNA聚合酶的辅助蛋白［1］，与细胞增殖有关，层粘连蛋白(LN)是基底膜的主要成分，在恶性肿瘤的生长、转移过程中起重要作用［2］。作者用PCNA与LN单克隆抗体行免疫组织化学染色，探讨其在口腔癌中表达与颈淋巴结转移之间的关系。

材料和方法

　　材料：泰山医学院附属医院未经放疗和化疗的口腔鳞状细胞癌41例，其中男24例，女17例，平均年龄57.6岁。根据Broder分级，Ⅰ、Ⅱ级高分化鳞癌30例，Ⅲ、Ⅳ级低分化鳞癌11例，共有颈淋巴结转移者13例，其中被诊断为Ⅰ、Ⅱ级高分化转移癌3例，Ⅲ、Ⅳ级低分化癌10例。标本经10%福尔马林固定，脱水、石蜡包埋，连续切片。切片厚5μm,分别做HE、PCNA和LN单克隆抗体染色，光镜观察。
　　免疫组织化学染色：采用ABC法。鼠抗PCNA单克隆抗体与ABC试剂盒均为DAKO公司产品，兔抗人LN单克隆抗体为Sigma公司产品。PCNA与LN一抗工作浓度为1：500，按ABC试剂盒提供说明ABC法染色。以癌旁正常粘膜作阳性对照。PBS代替一抗作阴性对照，均呈阴性染色。
　　PCNA阳性细胞每例10个高倍镜视野下所占细胞总数比例分为4级：1级阳性细胞数占细胞总数的0～25%；2级为26%～50%；3级为51%～75%；4级为76%～100%。LN阳性表达，LN呈连续性线状或呈间断性线状；阴性表达，LN呈碎片状或细胞外无LN。统计学采用χ2检验。

结　　果

　　PCNA分布与表达量：PCNA阳性细胞染色大多数局限于细胞核内，少数细胞胞浆内也有棕色颗粒，癌旁正常粘膜、基底细胞层也有少数阳性细胞。高分化鳞癌阳性细胞主要分布于癌巢周围，癌巢中心细胞呈散在阳性染色。30例标本中，9例PCNA染色呈2级，15例3级和6例4级。低分化鳞癌阳性细胞呈密集、无规律分布。11例标本中，PCNA染色3例3级；8例4级。经统计学处理，低分化鳞癌阳性数明显高于高分化组(P＜0.05)。
　　LN分布：在癌旁正常粘膜，LN呈连续性线状表达。30例高分化鳞癌，19例(63.3%)癌巢周围LN多数区域出现变细的线状表达，少数区域可见明显不规则和不连续性线状，个别地方呈中断和碎片状。11例(36.7%)低分化鳞癌，9例(81.8%)LN的表达呈碎片状或缺失。2例(19.2%)出现纤细线状表达，局部出现中断、碎片状。
　　PCNA、LN表达与颈淋巴结转移：13例颈淋巴结转移病人，PCNA染色均为3、4级。28例无颈淋巴结转移病人，9例PCNA染色为2级，15例3级和4例4级。颈淋巴结转移病人PCNA染色强度高于无颈淋巴结转移病人(P＜0.05)，13例颈淋巴转移病人中，9例LN阴性表达，4例阳性表达。28例无颈淋巴转移病人，24例阳性表达，4例阴性表达，经统计学处理，两者存在显著差异(P＜0.05)。

讨　　论

　　PCNA是一种核内蛋白质，在静止细胞中量很少。G1晚期开始增加，S期达高峰，G1、M期明显下降。许多研究证明，PCNA的表达能反映肿瘤的恶性程度［3］。本研究证明低分化鳞状细胞癌PCNA染色强度明显高于高分化鳞癌，且显示颈淋巴转移病人其PCNA染色强度也高于无颈淋巴结转移者。
　　LN是细胞外基质中基底膜的主要成分，癌细胞侵袭与转移突破基底膜经历粘附、降解和移动一系列过程［2，4］。高分化鳞癌由于部分保留了其起源细胞的本能，LN有不同程度表达。低分化鳞癌其异质性高，LN表现为阴性。颈淋巴结转移与LN表达也有关系，LN阳性者，其颈淋巴转移率低，LN阴性表达者其颈淋巴结转移率高。由此可见：LN阴性表达的癌组织，其侵袭性强、恶性程度高，更易早期转移。

责任编辑：姚红祥