提　要　目的　探讨口腔鳞癌IV型胶原（Col lV）和层粘连蛋白（LN）的表达及其与临床病理参数的关系。方法　应用免疫组化SABC法检测了30例口腔鳞癌组织和5例人正常口腔粘膜组Col Ⅳ和LN的表达，并用病理图像分析软件定量分析了两者的表达程度；对Col IV和LN的表达与临床病理参数的关系进行了统计学分析。结果　Col IV和LN的表达部位相同，主要分布于口腔粘膜和鳞癌组织基底膜；正常粘膜Col IV和LN表达完整连续，在鳞癌组织中两者有不同程度的破坏；图像定量分析表明：Col IV和LN的表达与病理分级和临床分期无关，而和是否有颈淋巴结转移关系密切。结论　口腔鳞癌中Col IV和LN的破坏可能是发生颈淋巴结转移的必要条件之一。
　　关键词　口腔鳞癌IV型胶原　　层粘连蛋白　　免疫组化　　转移

　　IV型胶原（collagen IV, Col IV)和层粘连蛋白（laminin, LN)是基底膜（basement membrane, BM)的主要组成成份，两者在上皮细胞的发育，分化，粘附和运动等方面发挥着重要作用。已有较多研究表明BM成份和肿瘤细胞的粘附以及癌细胞分泌蛋白溶解酶降解BM成份可能是转移发生所必经的环节〔1〕，可见肿瘤BM的变化和转移发生密切相关。本研究旨在通过研究口腔鳞癌Col IV和LN的表达，阐明颈淋巴结转移过程中BM的变化情况以及其和临床病理参数的关系。

材料和方法

　　1. 实验对象
　　30例人口腔鳞癌标本来自我院96年6月至98年10月间手术病人，5例正常口腔粘膜来自非肿瘤手术患者。30例鳞癌中男性21人，女性9人，年龄范围27至65岁。所有标本均经10％中性福尔马林固定，石蜡包埋，切片（5μm）。肿瘤标本与淋巴结转移癌标本均经病理证实。
　　2. SABC免疫组化法检测和表达
　　抗Col IV和LN单抗以及SABC试剂盒均购自武汉博士德公司。步骤参照试剂盒说明书进行，流程为：切片脱蜡至水，室温下3％H2O210分钟去除内源性过氧化物酶，复合消化液消化10分钟暴露抗原，正常兔血清作用10分钟封闭非特异性结合位点，一抗结合2小时，PBS洗3×2分钟，二抗结合20分钟，PBS洗3×2分钟，SABC复合物作用20分钟，PBS洗4×5分钟，DAB试剂盒显色，光镜下控制阳性反应程度，苏木精复染。以TBS代替一抗作为阴性对照。以正常口腔粘膜染色作为阳性对照。
　　3. 免疫组化结果计算机图像分析
　　每张切片于高倍镜下任选5个视野，利用MPIAS病理图像分析软件测量每个视野棕黄色产物的场面积并计算均值，求每张切片阳性产物场面积百分数，代表两抗原表达的阳性程度。
　　4. 统计学方法
　　组间比较采用Student t 检验，α=0.05为检验水准。

结　　果

　　1. IV型胶原和层粘连蛋白阳性产物均呈明亮的棕黄色染色，在正常口腔粘膜上皮，阳性产物可见于上皮基底膜、结缔组织间质、动脉及静脉管壁、肌肉以及腺体外膜。上皮基底膜以及血管壁，肌肉和腺体包膜均见连续线状的完整表达，IV型胶原和层粘连蛋白的表达形式一致。结缔组织间质中也见较多的阳性产物（图1、2）。
　　2. 在鳞癌组织中，高分化有明显角化的癌巢基底膜一般有较完整的IV型胶原和层粘连蛋白表达，呈连续线状，也有见基底膜两抗原表达破坏中断现象，无明显角化珠的癌巢以及癌细胞团块，条索周两抗原表达差异很大，有的有很完整的基底膜，有的呈断续的线状、片状、点状甚至完全没有阳性产物出现。细胞间质的阳性产物多少也不一样（图3、4、5、6）。
　　3. 图像分析结果及其和临床病理参数间的关系（表1）

 
图1　正常口腔粘膜组织IV胶原表达，于小动脉、小静脉管壁、腺泡周围可见完整的连续线状表达（免疫组化×200）
图2　动脉壁、肌细胞周见LN阳性表达（免疫组化×200）
图3　口腔鳞癌癌巢周围IV胶原表达完整，包裹每一个癌巢（免疫组化×200）
图4　口腔鳞癌癌巢周及间质IV型胶原仅见极少量表达（免疫组化×200）

责任编辑：姚红祥