【摘要】　目的　探讨在体外具有强大细胞毒活性的口腔癌浸润淋巴细胞在体内的抑瘤效果以及化疗药物环磷酰胺(cyclophosphamide, Cy)与肿瘤浸润淋巴细胞(tumor-infiltration lymphocyte, TIL)联合应用治疗口腔癌的可能性。方法　将舌鳞癌细胞系Tca 8113 注入裸鼠背部皮下建立移植瘤模型，取培养4周的TIL联合低剂量Cy局部注射，观察肿瘤体积变化及肿瘤生长情况。结果　①TIL+rIL-2和TIL+rIL-2+Cy组在3周内抑瘤率较高(分别为：86.1%±0.4%和97.7%±0.6%)，3周后抑瘤作用减弱；②TIL+rIL-2+Cy组抑瘤率较TIL+rIL-2组高(第8周抑瘤率分别为：20.0%±1.4%和75.5%±2.5%，P＜0.01)。结论　口腔癌TIL在应用后3周内具较强抑瘤作用，3周后减弱；联合应用Cy可获得更佳抑瘤效果。
　　【关键词】　口腔肿瘤　　淋巴细胞，肿瘤浸润

　　近年来，通过回输特异性免疫细胞的方法治疗恶性肿瘤是倍受关注的研究课题［1］，我们在成功地制备了口腔癌肿瘤浸润淋巴细胞(tumor-infiltration lymphocyte, TIL)的基础上，检测了其表型及体外抗瘤活性，发现口腔癌TIL在体外具有强大的抗瘤作用［2］。但由于体内、外环境的差别，TIL在体内发挥作用要受许多因素的影响，故体内外抗瘤作用必然会有差别。鉴于此，我们在建立人舌癌Tca 8113裸鼠移植瘤的基础上，联合应用环磷酰胺(cyclophosphamide, Cy)，观察其体内抑瘤效果，以期为口腔癌TIL的临床应用提供资料。

材料和方法

　　1.材料：
　　(1)实验动物：裸小鼠BALB/C-nu/nu 15只(华西医科大学实验动物中心提供)，鼠龄6～8周，体重18～24g。
　　(2)细胞系：Tca 8113人舌鳞癌细胞系(上海第二医科大学口腔医学院建株)。
　　(3)rIL-2：由第二军医大学提供。
　　(4)环磷酰胺(Cy)：购自Sigma公司。
　　2.方法：
　　(1)制备口腔癌TIL［2］。
　　(2)荷瘤鼠模型的建立及治疗方法［3］：取处于对数生长期的Tca 8113细胞经0.25%胰酶消化后，用Hank液洗3遍，计数后配成1×1010/L的瘤细胞悬液，给每只裸鼠背部皮下注射0.2ml，然后随机分为3组，即对照组、TIL+rIL-2组和TIL+rIL-2+Cy组，每组5只裸鼠。治疗方法：①对照组在相应部位注射等量的生理盐水；②TIL+rIL-2组于接种瘤细胞后12小时，在瘤细胞接种区注射2×1010/L TIL及1×104rIL-2各0.2ml;③TIL+rIL-2+Cy组：其中的TIL及rIL-2应用方法同②，在接种瘤细胞前24小时(即TIL和rIL-2应用前36小时)给每只裸鼠腹腔注射Cy 50mg/kg体重(表1)。

表1　各实验组的治疗方法(n=5)

组别	TCa8113细胞 (1×1010/L)	TIL (2×1010/L)	rIL-2 (1×104U)	Cy (2g/L)
对照组	0.2ml	0	0	0
TIL+rIL-2	0.2ml	0.2ml	0.2ml	0
TIL+rIL-2+Cy	0.2ml	0.2ml	0.2ml	0.5ml

 

　　注：效/靶=10∶1；TIL：浸润肿瘤淋巴细胞；Cy:环磷酰胺；rIL-2：人白细胞介素2，下表同
　　(3)移植瘤生长情况及抑瘤作用评价：荷瘤裸鼠饲养在SPF条件下，每周测瘤体大小，于接种肿瘤后第8周处死裸鼠，解剖称重，按下列公式计算抑瘤率：

肿瘤体积与三维测量值的换算：，L、W、H分别代表肿瘤的3径。

结果

　　1.对照组肿瘤生长情况：从第1周开始，肿瘤生长很快，到第8周肿瘤已近4 000mm3(表2)。

　　2.TIL+rIL-2组肿瘤生长情况：前3周肿瘤生长缓慢，第4周生长加快，到第8周达2 700mm3(表2)。
　　3.TIL+rIL-2+Cy组肿瘤生长情况：与TIL+rIL-2组相比肿瘤生长被抑制的时间更长，且在第8周末，其体积仅有775mm3(表2)。
　　4.抑瘤率：TIL+rIL-2组抑瘤率在前3周均保持较高水平，第4周则迅速减弱，说明TIL+rIL-2在前3周有较好的抑瘤作用；TIL+rIL-2+Cy组在观察的8周内，始终具有较高的抑瘤率，虽然在3周后抑瘤率有所下降，但仍保持较高水平，说明TIL+rIL-2+Cy在8周甚至更长的时间内均有较好的抑瘤效果。同时也说明，Cy的联合应用使TIL在体内的抑瘤作用更强，效果更持久(表3，4，附图)。

责任编辑：姚红祥