【摘要】　目的　探讨舌鳞癌组织中一氧化氮合酶(nitric oxide synthase, NOS)的表达及其与预后的关系。方法　用免疫组织化学法测定NOSI、NOSII和NOSIII在55例舌鳞癌组织中的表达。结果　NOSI、NOSII和NOSIII阳性表达率分别为30.9%、40.0%和38.2%。在有颈淋巴转移组与无淋巴转移组之间、5年生存组与5年内死亡组之间差异均有非常显著性(P＜0.01)。NOSII在G1、G2和G3之间，临床分期之间差异有显著性(P＜0.05)。结论　舌鳞癌组织中NOSI、NOSII和NOSIII的表达与其预后有关，NOSII对肿瘤的生长、分化、淋巴转移和预后均有重要作用。
　　【关键词】　癌，鳞状细胞　　舌肿瘤　　一氧化氮合酶　　预后

　　一氧化氮(nitric oxide, NO)是一种无机小分子，普遍存在于脊椎动物的各种细胞内。它是细胞间信息传递的重要调节因子，还可介导细胞免疫和细胞毒性反应。研究表明，NO可影响肿瘤的生长、分化、转移及其对化学和放射治疗的敏感性［1］。NO分子十分简单，但它的生物合成和代谢相当复杂。L-精氨酸和分子氧在一氧化氮合酶(nitric oxide synthase, NOS)的催化下，转化为L-羟基-精氨酸，然后进一步氧化生成L-胍氨酸和NO，NO再氧化成稳定的NO2和NO3。由于测量低水平NO2和NO存在一定的技术困难，NOS作为NO合成的关键酶，其活性变化直接调节NO的生成及其生物效应。NOS为异构酶，分为I、II、III型。目前国内对NOS与肿瘤生物学行为的临床研究报道较少。我们试图通过检测舌鳞癌组织中NOSI、II、III型的表达，来探讨NOS与舌鳞癌预后的关系。

材料与方法

　　1.材料：追踪复查了1987～1992年行舌鳞癌根治术的患者55例。男33例，女25例，年龄22～74岁，平均51.2岁。按UICC第四期分类方案，I、II、III和IV期分别有4例、15例、23例和13例。全部病例均经病理证实为鳞状细胞癌，组织分化程度为G122例、G226例和G37例。
　　2.方法：将石蜡包埋标本切取4μm厚组织5片，脱蜡至水，蒸馏水漂洗5min后，放入有柠檬酸盐缓冲液的容器中，微波炉加热10min(Defrost档)做抗原修复。室温下冷却30min，经PBS缓冲液漂洗5min后，用1%H2O2室温下孵育10min，再用PBS漂洗3×5min。滴加正常血清，37℃恒温箱孵育30min。吸干血清后用ABC法分别测定NOSI、NOSII和NOSIII(试剂为Santa Cruz公司产品)。滴加第一抗体于标本中，4℃冰箱中保存。第二天取出置室温中1h后，用PBS漂洗3×5s，滴加生物素标记的第二抗体，37℃下60s，再用PBS漂洗3×5min。滴加AB复合物37℃孵育，用PBS漂洗，DAB显色3～10min。经漂洗，复染苏木素，中性树胶封片。
　　3.结果判断：NOS表达于细胞浆，以阳性细胞数＞5%为阳性。阳性细胞根据着色(棕色)深浅分为：①“+”：浅棕色(图1)；②“++”:中等度棕色(图2)；③“+++”：深棕色(图3)。用已知阳性片作对照，以PBS代替第一抗体作阴性对照。

结果

　　55例舌鳞癌患者中，NOSI阳性17例，占30.9%(全部为“+”)；NOSII阳性22例，占40.0%(“+”10例，“++”8例，“+++”4例)；NOSIII阳性21例，占38.2%(“+”16例，“++”3例，“+++”2例)。经病理证实有颈淋巴结转移者16例，其NOSI、NOSII和NOSIII阳性率分别为68.8%(11/16)、87.5%(14/16)和81.3%(13/16)；无淋巴结转移者阳性率分别为15.4%(6/39)，20.5%(8/39)和20.5%(8/39)。经χ2检验(下同)，两组间比较差异有显著性(P＜0.01)。5年内死亡24例，其NOSI、NOSII和NOSIII阳性率分别为41.7%(10/24)、54.2%(13/24)和58.3%(14/24)。5年生存者分别为22.6%(7/31)、29.0%(9/31)和22.6%(7/31)，两组间比较差异亦有显著性(P＜0.05)。I、II、III和IV期患者5年生存率分别为4/4、10/15、12/23和5/13。G1、G2和G3患者5年生存率分别为16/22，12/26和3/7。不同分化程度和不同临床分期的病例间比较P＜0.05。不同分化程度和不同临床期别的病例NOSI、NOSII和NOSIII阳性率详见表1，2。

责任编辑：姚红祥