2.2　细胞界面切片的光镜观察

　　水平方向组织切片光镜观察，可见弧形细胞带由 数十层细胞组成，钛片—细胞界面在内侧，结构完整。细胞核呈紫红色，以卵圆形为主，细 胞浆呈粉红色淡染（图3）。

图1　第11代人胚成骨细胞传代第2 天(倒置显微镜，×200)图2　钛片-成骨细胞体外立体培养第3 天(相差显微镜，×40)图3　钛片 -成骨细胞体外立体培养第30 天(细胞界面原位切片，(光学显微镜，× 400)图4　钛片-成骨细胞体外立体培养第30 天细胞界面原位切片，(TEM)

　　2.3　细胞界面的透射电镜观察

　　细胞与钛片之间的界面由一层长梭形的细胞组成，胞浆内含有较丰富的线粒体和粗面内质网 ，并可见胶原纤维自胞膜向外的分泌现象（图4）。

　　3　讨　论

　　体外培养的成骨细胞是一种贴壁细胞，很难进行立体培养，目前尚无理想的立体培养模型。 一般多采用胶原作为细胞培养基底物，将其制成凝胶，使胶原纤维水合化，交织成网状立体 结构，引导细胞由胶原表面向内部移行并分布于网状结构内〔5〕。方法复杂，且三 维状态下的细胞数量有限，故不适用于模拟研究种植体骨界面的早期愈合过程。本实验则根 据体内种植体骨界面愈合早期成骨细胞的行为变化，利用体外培养条件下成骨细胞具有移行 、贴壁等特点，而建立起一种研究种植体植入早期成骨细胞的生物学反应以及种植体-成骨 细胞界面关系的实验模型。

　　将钛片放在成骨细胞层表面，打破了原已稳定的细胞培养体系 ，同时培养液胎牛血清中存在的大量生物大分子物质吸附于钛片表面〔6，7〕，引导 成骨细胞向钛片侧壁主动移行，并发生贴附〔8〕，在钛片侧壁与细胞层之间形成细 胞桥〔9〕。随着培养时间的延长，移行、贴附的细胞逐渐增多，形成复层细胞结构 ，细胞呈方向性排列。其中一部分细胞完全贴附于钛表面，这样就构建出成骨细胞的立体生 存环境。尽管本实验光滑表面周围细胞的透射电镜观察尚未见到明显的骨样结构，但在同类 研究中，粗糙钛表面与细胞界面处的透射电镜观察却发现典型的基质矿化过程和骨细胞的形 成。这说明此模型具有体外研究种植体骨界面的可靠性和真实性，是一个较为理想的立体模 型。它与在钛片表面直接接种细胞进行培养的方法相比，能够更真实地从动态和静态两方面 反映出体内骨愈合的早期变化过程。采用此模型并结合钛片表面直接细胞培养的一维实验模 型，即可较全面地反映出种植体对骨界面愈合早期细胞学方面的影响。

责任编辑：姚红祥