关键词：富血小板血浆
 
    富血小板血浆(platelet-rich plasma，PRP)是自体源性、浓缩的含人血小板的血浆,是全血经过离心、分离而得到的血小板浓缩物，亦称之为血小板凝胶、富生长因子血小板或自体浓缩血小板。PRP富含由血小板分泌的七种与所有创伤愈合过程有关的蛋白生长因子。这些生长因子包括3种同分异构体的血小板衍生生长因子（PDGFαα,PDGFββ,PDGFαβ），转化生长因子-β1（TGF-β1）、转化生长因子-β2（TGF-β2），表皮样生长因子（EGF），血管内皮生长因子（VEGF），成纤维细胞生长因子（FGF），胰岛素样生长因子（IGF）等［1，2］，它也含有血液中存在的3种蛋白质:纤维素、纤粘连蛋白及亲玻粘连蛋白［3］。这些因子对促进细胞的增殖与分化及组织的形成有着极其重要的作用。

　　1  富血小板血浆的制备及原理

    目前，PRP制备方法已明显简化，在普通条件下于手术室即可以制备。但在离心过程中必须保持无菌，并且在没有血小板溶解或破坏的高浓度下分离。不同的PRP仪制备的PRP结果不同。有些PRP仪不能产生足够数量的、促进愈合的浓缩的血小板，这可以解释许多关于使用PRP无效的研究。真正的PRP应是自体的，因异体血小板没有活力，且不能分泌生物活性生长因子，其细胞膜亦是抗原，可刺激机体产生抗体。

    PRP制备方法大致分为两类。一类通过手工操作，利用离心机等简单仪器在普通血库条件下制备，易于开展，但操作步骤较为繁琐；另一种方法为使用专门的血液分离仪器自动分离制备PRP。此法简单迅速，可将分离后剩下的血液成分及时回输到患者体内。制备PRP时，需要在血液中加入抗凝剂，常用抗凝剂为10%柠檬酸钠和EDTA。使用时，在PRP中加入凝集剂10%氯化钙和凝血酶，使其形成凝胶，可起粘结作用；同时将生长因子限制在凝集块内不易流失，有利于其发挥作用，且容易成形。

    不同的离心次数、离心力和离心时间制备的PRP中所含血小板浓度和活性同制备时的离心次数、离心力和离心时间有明显因果关系，不同制备方法获得的PRP中血小板的浓度为全血中的1.9~10倍［1，8，9］。其制备原理相同：即抽取全血，利用血液中各组分的沉降系数不同经梯度离心，将血液分为3层，底层为沉降系数最大的红细胞，最上层为上清液即乏血小板血浆（platelet-poor plasma,ppp），两者交界处有一薄层（buffy coat），一般肉眼不易看出，即富血小板血浆层。然后提取上清液及交界处以下的一部分红细胞，改变离心力再次离心，即可得到含有高浓度血小板的PRP。当离心力大于250 g时，会过多破坏血小板；离心时间小于5 min时，PRP中血小板浓度与全血中血小板浓度无显著差别。为此提示：离心以200 g离心力、10 min离心时间为最佳。也可将获得的PRP进一步浓缩，得到浓缩的PRP(concentrated platelet-rich plasma,cPRP),可以使血小板浓度进一步提高至全血的16倍。

　　2  PRP可能的作用机制

    目前对于PRP促进骨再生的机制尚未完全阐明。可能的作用机制是：PRP与凝血酶、氯化钙混合形成凝胶，其中所含的血小板α颗粒释放生长因子而起作用。其中最重要的是PDGF和TGF-β。这些生长因子在凝集十分钟后开始分泌，因此，PRP必须在凝集开始后十分钟内、在抗凝状态下制备并应用。凝集时，血小板被激活，α颗粒与血小板膜融合，通过添加组蛋白及醣侧链而成为活性状态，生长因子通过跨膜受体结合到细胞膜外表面。研究表明，成人骨髓基质干细胞、成骨细胞、成纤维细胞、内皮细胞及表皮细胞表达PRP中相关的生长因子受体。这些跨膜受体反过来诱导内源性的细胞内信号蛋白的活性，引起细胞增殖、血管生成、基质形成、胶原合成等细胞的基因序列表达。PDGF为一种糖蛋白，可刺激骨髓基质细胞的有丝分裂，增加成骨细胞的数量；也可刺激内皮细胞的生长，促进受植区的毛细血管的生成；刺激单核巨噬细胞趋化。TGF-β可激活成骨前体细胞趋化及有丝分裂，刺激胶原基质沉淀，抑制破骨细胞形成及骨吸收；血管内皮生长因子（VEGF）是强有力的血管生成因子，可促进创口愈合及血管化。

责任编辑：唐建华