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1.2.5 统计方法 上述实验结果均以 ±s表示，经t检验确定组间差异的统计学意义。
2 结 果
2.1 各种处理因素对人髁突软骨细胞前胶原proα1（Ⅱ）mRNA水平的影响
在含0.4％ NCS的DMEM培养基中加入IGF-Ⅰ、 bFGF、TGF-β1后24 h，软骨细胞proα1（Ⅱ）的mRNA水平出现不同变化，bFGF显著抑制proα2（Ⅱ）的表达，为对照组的0. 352倍，TGF-β及IGF-Ⅰ对proα1（Ⅱ）表达无显著影响(表1、2)。
2.2 各种处理因素作用对关节软骨细胞前胶原proα1（Ⅰ），proα1（Ⅲ）mRNA水平的影响
生长因子作用24 h，软骨细胞proα1（Ⅰ）mRNA水平在TGF-β1及IGF-Ⅰ作用下都有不同程度的升高,其中TGF-β1较为显著。为对照组的1.228倍，IGF-Ⅰ，bFGF与对照相比为1.164及0.840倍。3种生长因子对proα1（Ⅲ）均无显著作用(表1、2)。
表1 生长因子对人髁突软骨细胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型前胶原mRNA表达的影响
| 分组 |
mRNA密度值( ±s×103) |
| proα1(Ⅰ) |
proα1(Ⅱ) |
proα1(Ⅲ) |
| 对照组 |
8．29±0．66 |
5．13±0．53 |
4．75±0．98 |
| TGF-β |
10．18±0．84* |
3．51±0．20* |
3．56±0．53 |
| IGF-Ⅰ |
9.56±0.12* |
5.89±0.22 |
5.21±1.03 |
| bFGF |
7.77±0.14 |
1.81±0.22** |
4.06±0.04 |
与对照组比较 * P＜0.05 * * P＜0.01
2.3 几种因素作用下前胶原Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型mRNA相对值的变化
bFGF作用下,α1（Ⅰ）／α1（Ⅱ）显著升高，为4.293;TGF-β1能提高α1（Ⅰ）／α1（Ⅲ）值，为2.859(表2)。
表2 生长因子对关节软骨Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型前胶原mRNA相对水平变化
| 分组 |
前胶原mRNA |
| 实验组／对照组 |
相对值 |
| α1（Ⅰ） |
α1（Ⅰ） |
α1（Ⅰ） |
α（Ⅰ）／α（Ⅱ） |
α（Ⅰ）／α(Ⅲ） |
| 对照组 |
1 |
1 |
1 |
1.616 |
1.746 |
| TGF-β1 |
1. 228 |
0. 685 |
0.745 |
2.900 |
2.859 |
| IGF-Ⅰ |
1.164 |
1.148 |
1.084 |
1.628 |
1.835 |
| bFGF |
0.940 |
0.352 |
0.851 |
4.293 |
1.913 |
3 讨 论
软骨细胞分化状态的改变直接影响软骨基质的生化成份及力学特性。稳定软骨细胞表型,促进其增殖及基质合成，在关节软骨损伤及OA治疗中具有重要意义。关节软骨及软骨下骨质中存在着包括TGF-β、IGF-Ⅰ、bFGF、PDGF等多种生长因子。在局部调节着软骨细胞的分化及代谢［4］。由于以往的研究对象、组织来源以及细胞分化程度和培养条件等因素不同，结果分歧较大。因而有必要进一步研究不同生长因子对软骨细胞表型稳定性的调节，为生长因子在软骨损伤修复中的应用提供参考。
作者以往的研究表明IGF-Ⅰ是软骨细胞分化增殖及代谢的重要调节因子。它可促进细胞增殖及软骨特异性蛋白多糖及胶原的合成。本研究应用狭缝杂交方法，从转录水平进一步证实，在0．4％血清条件下IGF-Ⅰ作用24 h,软骨细胞α1（Ⅱ）前胶原mRNA水平有一定程度的增加，α1（Ⅰ）、α1（Ⅲ）前胶原 mRNA水平略有增加。各种前胶原mRNA相对水平无显著改变。说明IGF-Ⅰ具有稳定软骨细胞表型，促进软骨细胞分化的作用，提示在软骨损伤性疾患治疗中IGF-Ⅰ有着重要的应用前景。
TGF-β具有诱导未分化间充质细胞表达软骨特征性表型的作用。但其对分化软骨细胞的影响，目前尚不明确。本研究结果表明，TGF-β能够抑制软骨细胞Ⅱ型胶原的表达,结合前一部分研究，TGF-β对胶原蛋白合成的抑制作用,可以肯定TGF-β的作用发生在转录水平。但尚不能排除TGF-β对Ⅱ型胶原转录后mRNA稳定性的影响。在TGF-β促进Ⅰ型胶原表达的同时却抑制Ⅲ型胶原mRNA水平，前胶原α1（Ⅰ）／α1（Ⅱ）及α1（Ⅰ）／α1（Ⅲ）相对值升高。本研究的结果与Galera及Hortonin研究相一致。TGF-β1对胶原蛋白合成及Ⅱ型胶原基因表达的抑制，研究认为可能是调节了Ⅱ型胶原基因启动子及增强子区域中的DNA序列。Galera的研究还发现TGF-β在抑制原代软骨细胞Ⅱ型胶原表达的同时，促进了“反分化”软骨细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成，说明不同分化状态的细胞对TGF-β的反应性不同
责任编辑：姚红祥 | 
