【摘要】　目的　观察腭裂形成过程及腭突正常发育中的形态发生、组织学变化。方法　16只妊娠10天的C57BL/6N系小鼠随机分为实验组(管饲维甲酸80mg/kg)、对照组(管饲等体积植物油)，于GD1314，(13d14h略写为1314以下类同)，GD1322，GD148，GD1414，GD1422，GD158，GD1522，GD168剖腹取胚鼠头部标本分别做扫描电镜及HE染色。结果　实验组胚鼠腭突上抬延迟，腭突发育瘦小，两侧腭突不能在中线处接触融合。结论　维甲酸能够影响胚鼠发育中腭突腭间充质细胞增殖，导致日后骨量发育不足，形成腭裂。
　　【关键词】　腭裂　　扫描电镜　　维甲酸　　发育

　　目前，对口腔常见的畸形--先天性腭裂的研究中，稳定的腭裂动物模型的建立对探讨研究人类腭裂形成原因及演变机制，预防其发生有重要意义。国内外学者建立了不同种系药物诱导的各种小鼠腭裂模型，其中致畸率最高、腭裂发生最稳定的是C57BL/6N系小鼠的动物模型［1］，但国内尚未见到成功的报道。本研究采用C57BL/6N系小鼠管饲定量维甲酸(retionic acid RA)，结合扫描电镜观察，建立了稳定的小鼠腭裂模型，为研究探讨腭裂形成，预防其发生提供了帮助。

材料和方法

　　一、维甲酸给药浓度的观察
　　12周龄，体重25g以上的C57BL/6N系小鼠(购于西安医科大学实验动物中心)。按雌、雄比例2：1前一天晚8时同笼。次日晨观察雌鼠阴栓情况，有阴栓形成者为妊娠0天(Gestation Day0,GD0)，隔离饲养。妊娠第10天下午1时，12只孕鼠随机分为4组，管饲维甲酸剂量分别为100mg/kg、80mg/kg、60mg/kg、0mg/kg，溶于0.2ml的植物油中。
　　二、实验动物分组及标本制备
　　16只妊娠10天的孕鼠随机分为实验组和对照组。下午1时，实验组按体重80mg/kg的剂量将维甲酸溶于0.2ml的植物油中，管饲；对照组管饲等体积的植物油。于GD1314，GD1322，GD148，GD1414，GD1422，GD158，GD1522，GD1688个时间点分别脱颈处死实验组及对照组孕鼠各1只，剖宫取胚鼠，10%中性甲醛固定。常规组织处理后仔细切除躯干部，小鼠喙部朝下，常规石蜡包埋。5μm切片，HE染色，光镜下观察。另取实验组、对照组各1例胚鼠头部标本去除下颌，等渗生理盐水反复冲洗表面。3%戊二醛4℃固定2小时后，乙醇逐级脱水、经临界点干燥、真空蒸镀金属膜，S520扫描电镜观察拍照。

结　　果

　　一、腭裂模型的建立
　　孕鼠妊娠21天，0mg/kg组、60mg/kg组、80mg/kg组、100mg/kg组4组小鼠分别产仔鼠24只、2 0只、22只、0只。处死后去除下颌，暴露上腭，在体视显微镜下仔细观察仔鼠腭裂发生情况。前3组中发生腭裂的仔鼠分别为：0只、7只、22只，剂量为100mg/kg组的孕鼠在管饲维甲酸后，腹部逐渐变平，剖腹后未发现仔鼠，因此发生腭裂的仔鼠亦为0只。由此可见管饲维甲酸80mg/kg为安全有效的剂量。
　　二、腭突正常发育及腭裂形成过程的光镜观察
　　实验组及对照组分别获胚鼠53只、57只。平均每只小鼠受孕6.8只。
　　对照组：GD1314～GD148舌体位置接近鼻中隔，腭突在舌侧垂直生长，腭突内大量未分化间充质细胞密集，核深染，核浆比例大(图1)；GD1414～GD158舌体下降，腭突开始上抬，腭间质仍是密集的幼稚性间充质细胞，细胞间隙增大；GD1522～GD168舌体位置继续下移，两侧腭突完全上抬至舌体上，并向水平方向延伸，与鼻中隔接触。至GD168所有标本中两侧腭突完全接触融合，腭间质贯通，上皮细胞层消失(图2)。
　　实验组：GD1314～GD148舌体及腭突位置、形态与正常组无差异，腭间质亦是密集的未分化间充质细胞；GD1414～GD158舌体位置略低，腭突顶端呈垂直位，体积比对照组小，腭间质细胞形态无变化；GD1522～GD168舌体位置下降，有11例单侧或双侧腭突已上抬至水平位，GD168所有标本腭突均未融合(图3)。
　　三、腭突正常发育及腭裂形成过程中的扫描电镜观察

责任编辑：姚红祥