图1　对照组小鼠GD1322PCD阳性细胞数量少并分散于腭突间质中 TUNEL 伊红衬染 ×268

图1　对照组小鼠GD1522PCD阳性细胞集中于腭突的顶端 TUNEL 伊红衬染 ×268

图1　实验组小鼠GD1314PCD阳性细胞增多,分布于整个腭突中 TUNEL 伊红衬染 ×268

图1　实验组小鼠GD168PCD阳性细胞数量减少 TUNEL, 伊红衬染 ×268

表1　腭裂形成过程中程序性细胞死亡计数（PCD阳性指数）结果
 

腭突不同发育时期	标本数	PCD阳性指数(%)		P值
		实验组	对照组
GD1314～GD148	43	14	1.2	＜0.05
GD1414～GD158	38	6.7	0.8	＜0.05
GD1522～GD168	49	1.1	0.8	＞0.05

3　讨　　论

　　胚胎组织和器官的形态发生，是一个复杂的演变过程。这些变化有严密的规律，并表现出精确的时间顺序与空间关系，包括细胞的增殖、分化、相互识别及凝聚等过程。胚胎时期细胞增殖旺盛，受多种因素调控，如细胞生长激素、转化生长因子、神经生长因子、血管内皮生长因子等，分别调控相应细胞的增殖。使细胞在短时间内迅速生长，在胚胎发育期就形成各组织器官的雏形。同时，胚胎发育过程中也广泛存在细胞死亡现象，这也是胚胎正常发育的重要因素［3］。细胞这种生理性的死亡即是程序性细胞死亡，往往发生在一定的部位与特定时刻，受多种因素的调控。程序性细胞死亡是由细胞自身基因控制的以一种自杀方式发生的细胞死亡。受体内，体外各种非存活信号的诱导。细胞启动自身基因开放发生凋亡，以适应环境的变化。使机体清除对其生命和功能非必须的细胞，以维持机体内环境的稳定［4］。胚胎发育中，细胞受外界刺激，一旦发生超出生理范围的程序性细胞死亡或正常的程序性细胞死亡受到抑制，都会影响胚胎发育的正常过程，导致发育畸形的产生。
　　本研究结果发现，小鼠腭突在GD16之内完成了从形态发生、生长、上抬及接触融合的一系列过程。腭突从开始形成到GD148的垂直生长期中，是腭突间质未分化细胞大量增殖的阶段。细胞生长活跃，以适应快速生长变化的腭胚器官。在短时间内完成腭突的垂直生长、上抬及水平向融合过程。所以GD13～GD16的对照组腭突间充质细胞中仅出现少量的PCD细胞，散在分布于腭突中，在腭突发育到上抬及融合期时PCD细胞集中出现在发育中腭突的边缘及顶端，提示PCD是伴随腭突正常发育的一种生理现象，其功能可能为：①清除个别病变及损伤的细胞，②在腭突由垂直到水平位的变化中，边缘及顶端的间充质细胞发生PCD有助于完成腭突的上抬及融合。实验组腭突在垂直生长及上抬期均有大量PCD细胞阳性出现并分布于整个腭突内。表明腭突间充质细胞的增殖受抑制。细胞启动自身PCD相关基因开放，大量细胞发生程序性死亡，能够存活并继续参与腭突发育的间充质细胞数量明显减少，至GD15腭突体积比对照组小或不能在特定的时间内上抬。因此，到GD16时实验组胚鼠腭突由于在发育中大量超出生理范围的细胞发生PCD，使腭突发育障碍，延迟上抬，未能在腭突发育的最后阶段到达中线与对侧腭突及鼻中隔融合，导致腭裂。
　　由此可见，经维甲酸作用后的腭突间质细胞在增殖旺盛的生长期出现大量程序性细胞死亡。使腭间质中能继续生长、分化，参与腭突发育融合的细胞数量减少，影响了以后腭突形态、体积的发育，是导致腭裂的原因之一。虽然程序性细胞死亡基因尚未确定，已证实许多程序性细胞死亡相关基因在程序性细胞死亡中发挥着重要作用［5,6］。在腭裂形成过程中，如能探明哪些程序性细胞死亡相关基因被激活，及其在腭裂发生过程中的表达与调控变化，将对进一步探明腭裂形成的分子生物学机制、预防腭裂发生具有重要意义。

作者单位:250031　济南军区总医院口腔科(李　鑫),第四军医大学口腔医学院病理科(金　岩,董绍忠,朱萧玲)

4　参考文献

责任编辑：姚红祥