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〔摘要〕 目的：探讨前颌骨矫正对上颌骨生长发育的影响；检测上颌骨周围 骨缝成骨的活跃程度。方法：以40 d Wistar大鼠建立人 工双侧腭 裂模型，Latham矫正器前颌骨矫 正；应用免疫组化和原位杂交技术检测上颌骨周围骨缝TGF-β的表达。结果： 免疫组化检 测，矫正第7，14 天后实验组大鼠TGF-β的阳性表达与两对照组之间无显著性差异；原位 杂交检测，从第7 天开始实验组TGF-β mRNA阳性表达明显高于对照组，两对照组之间差异无显著 性。结论：前颌骨矫正后，大鼠上颌骨周围骨缝区有成骨活跃。
关键词 矫形外科手术；腭裂；上颌骨；近交系大鼠；转化生长因子
前颌骨矫正是在双侧唇腭裂患儿新生儿期，唇裂整复手术前进行的正畸治疗，应用矫正 器排齐紊乱的牙弓，内收前突的前颌骨，纠正侧方腭弓的塌陷，恢复腭的正常形态，为唇裂 、腭裂、槽裂整复术创造有利的条件。长期以来国内外学者对该治疗是否影响了上颌骨 的生长发育意见分歧，Berkowitz等认为早期颌骨矫正阻碍了面中部的发育，是对上颌 生长粗暴干扰〔1〕。Figveroa等认为早期上颌矫正可刺激上颌骨发育，防止上颌骨 塌陷，获得一个完美的腭〔2〕，目前国内外的报道均为临床的回顾性研究，实验研 究尚未见报道。
生长转化因子-β(transforming growth factor,TGF-β)是一类具有多种生物学活性的细 胞因子，是骨形态发生过程中的重要调节因子〔3〕。实验证明TGF-β可刺激多种骨 组织细胞的增殖分化，可刺激骨膜生发层内的骨祖 母细胞向成骨细胞转化，促进成骨细胞等增殖及合成细胞外基质的能力，进而促进新骨形 成。是骨形态发生过程中的重要调节因子〔3〕。
本实验目的是检验前颌骨矫正后大鼠上颌骨周围骨缝中TGF-β蛋白和基因的表达水平，探 讨上颌骨周围骨缝的生长发育的状态和成骨的机制。
1 材料和方法
1.1 动物的分组
如表1。40 d雄性Wistar大鼠，随机取12只，同一天手术造 裂，5 d后从造裂的大鼠中随机取6只安装矫正器，3组大鼠喂养条件、食物和环境相同(表1) 。
1.2 实验步骤
表1 实验动物分组
| 分组 |
实验时间 |
| 7 d(只/骨缝条) |
1 4 d(只/骨缝条) |
| 阴性对照组 |
3/9 |
3/9 |
| 阳性对照组 |
3/9 |
3/9 |
| 实验组 |
3/9 |
3/9 |
1.2.1 动物模型的建立
腭部造裂的部位见图1。250 g/L戊巴比妥(25 ml/kg)，腹腔内注射全麻，从门牙舌侧翻起腭 粘膜瓣，用裂钻在硬腭的前颌骨与侧腭板交界处“V”字去骨，裂隙宽约1.5 mm，腭瓣复位 缝合，纱条加压2 min完成手术
2.2 大鼠口内固定式矫治器的制作与安装
根据Latham矫治器的原理，制作适合于大鼠口内的固定式矫治器。其组成是：①固定于 大鼠 上腭后牙区的腭部弹簧式牵引器；②前颌骨牵引杆；③弹性牵引链。全麻下安装矫治器( 图2)。
图1 手术造腭裂示意
2.3 取材及标本处理
矫正7,14 d后断颈处死大鼠，分别取上颌骨周围骨缝：颧颌缝、翼颌缝、颞颧缝各两条，置 8.88 mol/L(4%)多聚甲醛液中固定1 h以上，并继以4.03 mol/L(15%)EDTA，1.11 mo l/L (0.5%)多聚甲醛液脱钙48 h，蒸馏水漂洗过夜。上行梯度乙醇脱水，二甲苯透明，浸蜡 ， 石蜡包埋。
2.4 免疫组织化学标记
TGF-β单克隆抗体均由第四军医大学口腔病理教研室提供。石蜡切片，捞片于预涂有2%APE S载玻片上，60 ℃烤片1 h。二甲苯脱蜡。下行梯度乙醇水化，0.05 mol/L PBS漂洗。体积 分数为3%过氧化氢/乙醇溶液处理30 min(室温)阻断内源性酶，20 g/L透明质酸酶消化20 mi n(37 ℃)，PBS漂洗。鼠血清30 min(37 ℃)，一抗TGF-β(1∶5 PBS稀释)过夜(4 ℃冻箱)。复 温1 h(37 ℃烤箱)，PBS漂洗，二抗，PBS漂洗。ABC显色约2 h。常规脱水透明，封片。
2.5 原位杂交
图2 前颌骨矫正器
TGF-β寡核苷酸探针，DIG标记试剂盒均由第四军医大学口腔病理教研室提供，石蜡切 片常 规脱蜡至DEPC水及0.1 mol/L PBS(pH7.4)，0.2 mol/L HCl 20 min，蛋白酶K 37 ℃消化15 min，2.26 mol/L (0.2)%甘氨酸10 min，22.2 mol/L (10%)多聚甲醛30 min，梯度酒精 脱水后42 ℃杂交2 0 h，2×ssc，1×ssc，0.5×ssc依此充分洗涤，Buffer l洗，正常羊血清封闭，滴加Anti - DIG-AP(1∶500)，37 ℃孵育2 h，Buffer 1、Buffer 3充分洗涤，滴加显色液(NBT/BCIP) ，暗处显色18 h后，用TE充分显色以终止反应常规脱水透明，封片。
责任编辑：姚红祥 |