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〔摘要〕 目的：研究维甲酸和地塞米松联合用药对BALB/C 近交系小鼠腭部发育的影响。方法：将BALB/C 系孕鼠分为给药组和对照组，在妊娠第12 d分别给药，并于妊娠期第138, 1320, 148, 1420, 158, 1520, 168 d处死孕鼠，取胎鼠头部做冠状切片，HE 染色，进行观察。结果：维甲酸和地塞米松联合用药可诱导BALB/C 系小鼠形成腭裂，其主要原因是腭突上抬延迟。结论：维甲酸和地塞米松联合应用诱导BALB/C 近交系小鼠形成腭裂是一种稳定的腭裂动物模型。
关键词 腭裂;维生素A酸类;地塞米松;动物模型
小鼠的腭部发育与腭裂形成与人十分相似，目前对人的腭裂研究多以小鼠来替代，但由于小鼠种系繁多，且对各种药物的敏感性不同，因而腭裂的动物模型也多种多样 。 国外学者多采用C57BL/6N 系小鼠进行研究，但因饲养条件、药物种类等要求均较高，且受动物种系所限，因此不适合于国内腭裂研究的大量开展［1］。本试验采用常用的两种药物维甲酸(retinoic acid, RA)和地塞米松(dexamethone,DEX)作为复合型致畸剂，诱导常用的BALB/C 近交系小鼠产生腭裂，为今后腭裂的大量研究提供了可靠的动物模型。
1 材料与方法
1.1 实验动物 前一天将8～10 周的BALB/C近交系小鼠，按3∶1的雌雄比例同笼，次日上午8:00观察雌鼠的阴栓形成情况，有阴栓者为受孕鼠，并将该日定为妊娠GD 0 d(gestation day,GD)。在GD1215(表示妊娠期第12 d第15 h)，将14 只孕鼠按1:1 的比例随机分为给药组和对照组，同时给药。给药组：管饲维甲酸(每千克体重给100 mg)(上海第六制药厂)，同时腹腔注射地塞米松(每千克体重给10 mg)。对照组：管饲无菌生理盐水(每千克体重给10 mg), 同时腹腔注射无菌生理盐水(每千克体重给10 mg)。
1.2 标本制备及染色 分别于GD138、1320、148、1420、158、1520、168用脱椎法处死孕鼠，取出胎鼠，将头部标本固定于40 g/L多聚甲醛，脱水后常规石蜡包埋，做5 μm冠状切片，HE 染色，光镜下观察腭部发育。
2 结 果
从形态上观察，BALB/C 系小鼠腭部的正常发育大致可分为五个阶段：① 腭突发生期; ② 腭突向下垂直生长期; ③ 腭突上抬期; ④ 腭突水平生长期，⑤ 腭突融合期。以下各个时间点是BALB/C系小鼠腭部的正常发育情况：GD1220至GD138，舌体占据了口腔的大部分空间，此时腭突刚刚形成，侧腭突沿着舌体两侧向下生长。GD138至GD1420，随着舌体的生长，侧腭突继续向下生长(图1)。GD1420至GD1520,下颌骨的发育使得舌体继续下降，腭突逐步开始上抬(图2)。GD1520腭突上抬并向水平方向生长。GD168两侧腭突已经融合(图3)。
图1 对照组GD148，腭突开始沿舌体两侧下降，HE染色，×20
图2 对照组GD158，腭突开始上抬，HE染色，×20
图3 对照组GD168，腭突已完全融合，HE染色，×20
给药组GD13, GD14 与对照组相比无明显变化，腭突的生长方式都是垂直向下生长，GD158至GD1520，对照组腭突开始上抬，而给药组的腭突单侧或双侧上抬延迟。在GD168，对照组的腭突已完全融合，给药组由于腭突上抬延迟，两侧腭突不能完全融合(图4)。GD1520和GD168共取胎鼠19 只，其中单侧或双侧腭裂的有16 只，腭裂发生率达84.2%。
图4 给药组GD168，两侧腭突不能融合，HE染色，×20
3 讨 论
研究表明，BALB/C 近交系小鼠的腭部发育为妊娠期第13至16 d。RA 和DEX 联合用药对腭突垂直生长期无明显作用，其作用时间主要在GD15 的腭突上抬期。给药后，腭突上抬明显延迟，比对照组上抬期约晚12 h，以致两侧腭突不能融合。
BALB/C 近交系小鼠在医学研究中应用十分广泛，该小鼠对温度、环境、水分、饲料的要求都不高，一般的实验室都可以饲养，且繁殖力强，产仔多，每窝约8～12 只，很适合建立腭裂的动物模型。目前国外的腭裂研究多用C57BL/6N近交系小鼠，较少采用BALB/C 系小鼠，可能是因为RA 等致畸药物诱导BALB/C 系小鼠的腭裂发生率不太高。本文研究结果表明，RA和DEX 联合用药，其腭裂发生率可达84.2%。作者也尝试用C57BL/6N 近交系小鼠做腭裂试验，发现在GD10 给RA (每千克体重给100 mg)后，腭裂发生率确实可达100%，但该种系小鼠体形较小，饲养条件要求较高，如温度要求在18～25 ℃之间，过冷过热均不利于小鼠的生长，而且在妊娠期间要经常给予高脂饲料，另外，C57BL/6N 系小鼠繁殖力较低，每窝约5～8 只，产后易食仔鼠，这些不利因素都给腭裂研究带来了困难。与C57BL/6N 系小鼠的腭部发育相比，BALB/C 近交系小鼠的腭部发育要晚12 h左右，其他种系如A系、NIH 系则存在应用不够普及的缺点。因此，与C57BL/6N 系和其他种系的小鼠比较，BALB/C 系小鼠的优点十分明显。
责任编辑：姚红祥 |