稳定表达骨形成蛋白II型突变受体的NIH3T3细胞的建立及鉴定

作者:刘源 金岩 李媛 赵宇  文章来源:实用口腔医学杂志 

2006-12-31 17:08:45         【博客】 【论坛】 【投稿】 【打印】 【关闭

 

图3 未转染细胞(苏木精衬染×200)

  3 讨论

  核酸转染技术已经成为研究基因调控及功能的重要方法。广泛应用的转染核酸技术方法包括磷酸钙共沉淀法、电穿孔法及病毒载体法〔3〕,这些方法在对细胞的转染过程中被证明有效。近年来,阳离子脂质体介导的基因转染方法应用极其广泛,与其它方法比较,重复性好,能使大多真核细胞得到高表达。FuGENE6 transfection 试剂是核酸转染技术家族的新成员,这是一种非脂质体转染技术,与以前的方法比较,对细胞的转染效率极高而毒性极小,对细胞基本没有损伤。对实验条件不象其它方法那样严格,在有血清及无血清时,都能获得极高的转染效率。

  骨形成蛋白(BMPs)是一个至少包括20个成员的家族,其成员在结构上相似,但其功能在不同时期、不同阶段有着极大的差异。骨形成蛋白(BMPs)不仅在骨、软骨及与骨骼有关的结缔组织的形成上有重要作用 ,而且在胚胎发育,器官形成及细胞分化中起着十分重要的调控作用〔1,2〕。在脊椎动物中胚层的发育诱导过程中,BMPs是重要的背-腹化发育促进因子,几乎胚胎发育的关键步骤都受到了BMPs的调控〔4〕。

  与其它TGF-β超家族成员一样,BMPs家族的成员都通过结合细胞表面的两种丝氨酸/苏氨酸激酶受体(即BMP I型、II型受体)发挥作用,I型、II型受体与配体结合形成异聚体,从而将BMPs信号传递给下游作用物。为研究BMPs信号转导在组织发育和细胞分化中的作用,我们以BMPs II型突变受体的cDNA为目的基因,以小鼠成纤维细胞为载体细胞,利用FuGENE6 transfection agent转染技术构建了稳定表达BMPs II型突变受体的细胞株。该细胞株可用于研究BMPs 信号对间充质细胞分化的调控,对于研究和阐明BMPs信号转导在组织发育和细胞分化中的作用具有重要意义。

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责任编辑:姚红祥  

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