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〔摘要〕 目的：观察放线共生放线杆菌对人牙龈成纤维细胞超微结构的影响。方法：100mg/L细菌表面相关物质和人牙龈成纤维细胞在CO2孵箱内培养72h后，采用透射电镜观察细菌表面相关物质对成纤维细胞超微结构的影响。结果：主要使细胞粗面内质网扩张，线粒体水肿，溶酶体增多，但未见膜性结构有明显破坏现象。结论：此物质可影响细胞的超微结构，但不致细胞死亡。
The effects of surface-associated material of acctinobacillus actinomycetemcomitans on the ultrastructure of human gingival fibroblasts
Zhang Yaqing, Xiao Mingzhen, Zhao Shouliang.
Stomatological College, Fourth Military Medical University, Xi'an 710032
〔Abstract〕Objective: To investigate the effects of surface-associated material(SAM) of Actinobacillus actinomycetemcomitans (A.a) on the ultrastructure of human gingival fibroblasts(HGFs). Method:HGFs were exposed to 100 mg/L of SAM in a conventional culture for 72 hours, then the ultrastructure of the cells were observed under transmission electron microscope(TEM). Result:Dilated rough endoplasmic reticulum, distended mitochondria and increased lysosome were observed, while no obvious damage of membrane structure was found. Conclusion: SAM at the concentration of 100 mg/L may cause ultrastructure changes of HGFs rather than cell death.
Key words Gingiva; Actinobacillus actinomycetemcomitans; Fibroblasts; Ultrastructure
放线共生放线杆菌表面相关物质对成纤维细胞、细胞核面积有明显影响，并可抑制成纤维细胞的分裂、增殖和DNA合成［1,2］。由于超微结构在一定程度上能反映细胞的功能，因此，本组观察放线共生放线杆菌表面相关物质对人牙龈成纤维细胞超微结构的影响，为深入探讨牙周病的致病机理提供形态学依据。
1 材料和方法
1.1材料
放线共生放线杆菌，100ml玻璃培养瓶(Gibco USA)，CO2孵箱(Forma Scientific USA)，透射电镜，RPMI1640培养液(Gibcio USA)，胰蛋白酶(Difco进口分装)，胎牛血清(浙江华清湖犊牛利用研究所)，YJ—875型超净工作台(苏州净化设备厂)，离心机(LD4—2北京医用离心机厂)
1.2方法
1.2.1细胞培养：低温保存的菌种Y4复苏，传代并鉴定，待进入对数生长期，移入300mlGAM液体培养基内在37℃含CO2、H2、N2的体积分数分别为10%、10%、80%条件下培养72h，培养结束后在4℃下低温超速离心机离心分离出细菌(8000g×30min)，弃去沉淀，上清液备用。
1.2.2细菌表面相关物质的提取、纯化：采用盐析和高效液相色谱法，简单步骤为：将上述上清液在超滤浓缩系统中浓缩10倍，加入600g/L硫酸铵于冰箱中过夜，再收集沉淀(20000g×20min4℃)，沉淀物在0℃对双蒸水透析，然后经高效液相色谱TSK-G300SW下纯化。
1.2.3取第6代人牙龈成纤维细胞，2.5g/L胰酶消化后，以RPMI1640培养液制成细胞悬液，密度为6×107个/L，等量传代于4个100ml玻璃培养瓶中，体积分数为5%CO2孵箱内过夜使细胞贴壁。然后弃培养液，加入体积分数为10%胎牛血清及100mg/L细菌表面相关物质的RPMI1640培养液，CO2孵箱内培养72h。空白对照组除不含细菌表面相关物质外，其余均与实验组相同。
培养结束以后，细胞以2.5g/L胰酶消化，分别收集于各自的离心管内，短时低速离心(800～1000r/min5min)，弃上清，体积分数为3%戊二醛固定细胞团2h，丙酮系列脱水，真空干燥，以Epon812环氧树脂包埋，超薄切片，染色后透射电镜下观察。
2 结 果
对照组 人牙龈成纤维细胞呈长梭形，核椭圆，染色质均匀分布于核内。在靠近核的周围有发达的粗面内质网，高尔基氏体多位于核的两端，线粒体呈长条状，双层膜结构完整，排列规则，溶酶体呈圆形，大小均匀，膜完整，仅见少量脂肪滴，胞浆内含有大量微丝(图1)。
责任编辑：韩晓炜 | 
