1.4细胞染色与计数　细胞培养结束后，用φ为10%磷酸缓冲福尔马林液固定细胞（4℃,24h）,按Burstone方法［6］进行细胞抗酒石酸磷酸酶（TRACP）染色，在倒置显微镜下观察（细胞呈深褐色，单核或多核），用计数器计数。

　　1.5统计学分析　采用Wilcoxon秩和分析法进行统计学处理。

　　2　结　果

　　结果显示，在不同浓度中，仅1.0g/L丹参培养组TRACP阳性细胞的形成受到明显抑制（图1），与对照组比较，其TRACP阳性细胞数，仅为对照组的29.8%；而PGE2（10-7mol/L)与1.25（OH）2D3培养组(10-8mol/L)TRACP阳性细胞数，特别是多核破骨细胞数明显增多，分别增加了6.04倍和6.68倍（图2）；丹参与PGE2或丹参与1.25（OH）2D3混合培养组TRACP阳性细胞数均明显少于单纯加PGE2或1.25（OH）2D3培养组，仅为后两组的35.2%和39.3%，（图3，4）。这些结果说明丹参具有抑制破骨细胞形成的作用。

1　丹参对TRACP阳性细胞生成的影响(n=4)

2　各组TRACP阳性细胞生成数(n=4)

3　丹参对PGE2作用的影响(n=4)

4　丹参对1.25(OH)2D3作用的影响(n=4)

　　3　讨　论

　　3.1抗酒石酸磷酸酶与破骨细胞　抗酒石酸磷酸酶（tartrate-resistant acid phosphatase简称TRACP）被认为是破骨细胞的标记酶。它不但可以反应多核破骨细胞生成数，还可以反映破骨细胞前体细胞的数量，该类细胞多为单核。这些单核的TRACP阳性细胞在PGE2,1.25（OH）2D3及一些骨吸收因子（如IL-1,IL-6,TNF等）的作用下，可以融合形成多核的破骨细胞［7～8］。

　　3.2成骨细胞在骨吸收中的作用　研究表明，1.25（OH）2D3,甲状旁腺素（PTH）,胰岛素样生长因子（IGF）,肿瘤坏死因子（TNF）,白细胞介素（IL-1,IL-6）,转化生长因子（TGF-β）等都通过直接或间接作用于成骨细胞而影响破骨母细胞向成熟的多核破骨细胞转化，PGE2则是这一过程中重要的调节因素［9～11］。由此可见，骨吸收过程是一个多种因素共同参与的、多途径调节的复杂过程，在这一过程中，成骨细胞发挥了非常关键的作用。

　　3.3丹参对破骨细胞生成的作用　研究表明，丹参具有增加成骨样细胞碱性磷酸酶活性的作用，从而增强成骨细胞的功能与活性，促进新骨形成［5］。本研究发现，在骨髓培养中，丹参组不仅TRACP阳性细胞减少，而且更缺少多核破骨细胞，说明丹参不仅抑制了破骨母细胞的形成，更重要的是抑制了破骨母细胞向多核破骨细胞转化。此外，丹参还对PGE2及1.25（OH）2D3的促破骨细胞生成作用产生抑制，致使多核破骨细胞数大量减少，而这两种物质正是通过促使破骨母细胞融合形成多核破骨细胞来促进骨吸收的。这一结果说明丹参在体外骨髓培养中对破骨细胞的抑制作用主要是通过抑制破骨母细胞向成熟的多核破骨细胞转化而实现的。有学者［12］认为丹参具有钙离子阻滞剂作用,可以阻止细胞对钙离子的摄取,降低细胞内Ca2+与cAMP浓度,影响单核细胞向破骨细胞转化,从而推测钙离子阻滞作用可能是丹参对破骨细胞产生抑制作用的主要机理。此外，丹参在增强成骨细胞的功能与活性，促进新骨形成的同时，可能作用于成骨细胞，抑制其产生或分泌一些破骨细胞促进因子，使破骨细胞生成减少，影响骨吸收。

　　参考文献

　　1 林润台，孙翼，王忠，等. 丹参促进下颌骨骨折愈合的超微结构研究. 中华口腔医学杂志, 1992,27（4）：216

　　2 秦军志, 王贤淑. 丹参对大鼠胫骨骨折愈合过程中血清、骨痂及骨组织中钙、锌、铜的影响. 中国中西医结合杂志, 1992,12（6）：354

　　3 苏晓华，梁殿权，王孝铭， 等. 丹参素（DS－182）对大鼠心肌线粒体氧自由基损伤的保护作用. 中华病理生理杂志，1992,21（2）：122

　　4 胡美珠，柴本甫，徐荣辉， 等. 丹参对体外鸡胚胎颅盖骨成骨细胞样细胞分裂增殖的放射自显影研究. 中华外科杂志, 1993,31（4）：252

责任编辑：韩晓炜