摘要　目的：观察IL-1和地塞米松对体外培养的人下颌髁状突软骨细胞一氧化氮(NO)生成的影响。方法：用硝酸还原酶法测定细胞培养上清液中NO终末代谢产物浓度的变化。结果：单独使用IL-1，软骨细胞培养液中 水平显著升高。给予地塞米松能降低细胞培养液中的升高幅度，但仍高于空白对照组。结论：IL-1能诱导体外培养的人下颌骨髁状突软骨细胞NO的生成，而地塞米松对这种效应有抑制作用。
关键词　软骨细胞　一氧化氮　IL-1　地塞米松

　　骨关节病(Osteoarthrosis,OA)是一种退行性关节疾患，发病率高，但确切病因及发病机理不清，一般认为与创伤，炎症，衰老和遗传等多种因素引起的软骨代谢异常有关。近年的研究证实OA的关节局部组织产生大量细胞因子如IL-1，IL-6和TNF-α等，但这些细胞因子对软骨细胞增殖、代谢的作用机理和影响途径，目前尚未定论。一氧化氮(NO)作为一个新的非特异性免疫效应分子，参与了机体多个系统的生理、病理过程，有文献^［1，2］报道颞颌关节紊乱症患者关节滑液中NO水平明显升高，提示NO参与了骨关节病的发病过程。本实验拟观察IL-1对体外培养的人胚髁状突软骨细胞NO生成的影响以及皮质激素类药物地塞米松对这种变化的调节作用，从而探讨细胞因子导致软骨损害可能的作用途径。

材料和方法

　　一、实验材料
　　DMEM培养基(Gibco,USA)，Ⅱ型胶原酶(Sigma chemicals),胰蛋白酶(Gibco,USA)，NO试剂盒(购自南京建成生物公司)，新生小牛血清(购自华西医科大学分子生物学实验室)，IL-1 β(北京军事医学科学院产品)，地塞米松(华北制药厂)，其余试剂均为国产或进口分装分析纯试剂。
　　二、细胞培养
　　下颌骨髁状突软骨取自5月龄水囊引产人胚胎，参照文献方法^［3］，经机械分离，胰蛋白酶、胶原酶消化获得。取第二代人髁状突软骨细胞以DMEM调整细胞密度为1×10⁵/ml，定量接种于24孔板，于二氧化碳孵箱内培养至长成单层。DMEM洗涤2次后，更换培养基，加入含不同处理因素的等量DMEM培养基，实验分组如下：(一)空白对照组：(二)IL-1 β组，分别按浓度(0.1，1，10，100ng/ml)加入IL-1 β。(三)IL-1 β(0.1，1，10，100ng/ml)及地塞米松(100μg/ml)配伍组。继续培养48h收集各样品培养液。
　　三、各样品培养液NO含量的测定
　　采用硝酸还原酶法测定，取培养液100μl，经硝酸还原酶室温孵育45min,用30%硫酸锌去蛋白。离心取上清，加入等体积的Griess试剂(1%对氨基苯磺酸，0.2%萘基乙二胺，2%磷酸)混合，反应15min于Beckman型分光光度计测定各样品于550nm处的吸光度值。并根据标准品100μmol/L KNO₃吸光度值，按公式：

 ，求得样本中的浓度。

　　四、统计学处理
　　结果用均数±标准差( )表示，并作t检验以确定均数差异的统计学意义。

结　果

　　一、不同剂量IL-1对髁突软骨细胞NO生成的影响
　　与对照组相比，向细胞培养液中单独加入递增浓度(0.1，1，10，100ng/ml)的IL-1β，各组培养上清液NO生成量逐渐增加，表明IL-1在0.1-100ng/ml范围浓度依赖性地显著增加人髁状突软骨细胞NO的生成(表1及图1)。

图1　单独加入IL-β和配伍加入Dexa后NO生成量变化曲线图

表1　IL-1单用组与对照组 含量比较( )

**P<0.01

　　二、地塞米松(Dexa)对IL-1诱导软骨细胞生成NO的调节作用
　　将地塞米松与IL-1β配伍使用，在软骨细胞培养上清液中检测到NO生成的增加幅度受到明显抑制(P<0.01)，但该实验组的NO生成量仍高于对照组(P<0.01),表明Dexa可以部分阻止IL-1β诱导产生的NO生成(表2、表3及图1)。