[摘要]  目的  观察重组人骨形成蛋白—2(rhBMP-2)复合1％透明质酸钠骨膜内诱导成骨的组织学过程，探讨其诱导成骨的机制。方法  将rhBMP—2和1％透明质酸钠复合后植入9只新西兰大白兔胫骨骨膜下骨皮质的表面，对侧植入1％透明质酸钠作为对照，分别于术后第4、8、12周处死3只动物取标本进行大体和组织学观察。结果  rhBMP—2复合1％透明质酸钠组骨膜内侧有明显的新骨形成，新骨呈渐进性的成熟过程，12周时和原有骨的组织结构一致。结论  rhBMP—2和1％透明质酸钠复合后可以用于骨缺损的修复。
[关键词]  重组人骨形成蛋白—2；透明质酸钠；诱导成骨
    骨缺损的修复是口腔颌面外科的研究热点。采用各种生长因子，如骨形成蛋白、胰岛素样因子、转化生长因子—B(TGF-B)等诱导成骨是目前的研究方向之一。作为一种基因重组的骨诱导蛋白，重组人骨形成蛋白—2(rhBMP—2)的成骨作用已经得到广泛的认可。使rhBMP-2发挥成骨作用的重要条件是rhBMP-2必须和合适的载体相结合，常用的载体有胶原、羟基磷灰石、磷酸钙、聚乳酸等。不同的载体具有各自的适应证。我们将rhBMP-2和1％的透明质酸钠(SA)相复合，将此复合物种植于兔胫骨表面，进行诱导成骨的动物实验，采用组织学方法分析和探讨rhBMP-2复合SA成骨作用的效果和机制。
1 材料和方法
1．1．1  实验动物及分组  新西兰大白兔9只，雌雄不限，体重2．8—3．3 kg，由南京市农业科学院试验动物中心提供。实验动物随机分为3组，每组3只。采用标准兔饲料喂养，50g／(kg·d)，饮水量不限。
1．1．2  主要试剂  rhBMP-2由中国军事医学科学院三所八室提供。塑料离心管密闭后用环氧乙烷消毒8h，4 ℃冰箱保存。1％SA由山东正大福瑞达制药有限公司生产(商品名：施沛特)无菌注射器包装，每支2 ml，每毫升含SA 20mg。
1．2  方法
1．2．1  rhBMP-2-SA复合物的制备  将rhBMP-2约4．5mg和1％SA l．8m1混合，振荡器振荡，充分搅拌均匀，每0．2ml复合物中含rhBMP-2约0．5mg。
1．2．2  动物手术及处理  用3％戊巴比妥钠30mg／kg经兔耳缘静脉行全麻，麻醉成功后随机选取一侧胫骨铺手术洞巾。于胫骨内侧近1／3段切开皮肤、皮下组织和骨膜，切口长约2 cm。于骨膜与骨皮质之间填人rhBMP-2—SA复合物约0．2ml，范围约1．0cmXl．0cm。分层缝合骨膜、皮下及皮肤，于另一侧胫骨采用同样的手术方法填人SA 0．2ml。术后给予庆大霉素1万U／kg、每日2次肌内注射，连续注射3d。分别于手术后第4、8和12周将动物全麻后用静脉推注空气处死一组动物。
1．2．3  观察研究  大体观察：兔处死后取两侧胫骨先进行大体解剖观察，并记录新骨生成情况。组织学观察：取标本并用10％甲醛固定，硝酸脱钙，梯度乙醇逐级脱水，石蜡包埋，切片，苏木精—伊红染色，光学显微镜下观察新骨生长情况。以新西兰白兔正常胫骨苏木精—伊红染色切片作为正常对照。
2  结  果
    所有动物术后伤口愈合良好。实验组各期标本均有明显的新骨形成，范围约1．0cmXl．0cm，高度0．4—0．5cm。对照组各期标本无新骨形成。
    实验组4周标本大体和镜下观察：实验组4周标本胫骨和骨膜之间有明显的新骨形成。新骨隆起于胫骨表面如山丘状，表面疏松多孔，颜色鲜红，和周边骨有明显的分界，质地较正常骨软(图1)。镜下观察发现骨小梁稀疏，排列不规则；骨小梁周边成骨细胞增生活跃，骨基质沉积明显；骨小梁周间质细胞增生活跃，血管形成丰富。同时发现有少量巨噬细胞。骨膜明显增厚，骨膜内细胞增生活跃(图2)。

   图1  实验组兔术后4周胫骨标本大体观

    图2  实验组兔4周胫骨标本组织学观察(苏木精—伊红染色x100)

责任编辑：姚红祥