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〔摘要〕 目的:观察骨骼肌神经切断后的形态学动态变化,特别是较长时间失神经肌肉有无退变及再生。方法:以纯系BALB/C小鼠为实验动物,切断一侧坐骨神经,术后1、2、4、8、12和16周分别取腓肠肌进行光电镜观察。结果:失神经早期主要为肌纤维萎缩,随后退变、再生,较长时间失神经以后再生的肌细胞再发生退变。长时间失神经肌肉光镜下见成堆的细胞核,似大量的增生的纤维结缔组织取代肌组织,电镜下可见到含有不成熟肌原纤维、胞核位于中央的不成熟肌细胞。结论:失神经后肌细胞退变和再生同时存在,由于无神经支配,再生的肌细胞不能分化发育为成熟的肌纤维,而再发生退变。长时间失神经后,最终可能使肌卫星细胞或其它成肌细胞不断消耗,使肌肉恢复功能差。 关键词 肌;肌去神经法;萎缩;显微镜检查
骨骼肌的功能性重建决定于神经和肌肉两方面的因素,一要有到达肌肉并与肌细胞接触的神经纤维,二要有能接受神经的肌细胞。显微外科技术为游离移植和单纯神经损伤的肌肉提供了神经来源,对如何促使神经到达肌肉的研究亦较多。但无论立即吻合还是延期神经吻合,或别的术式,再生神经到达肌肉均需要一定时间,不同术式所需时间长短不等,即失神经肌肉总是不能立即与神经发生结构和功能性联系而发生萎缩,使其最终功能受到影响。失神经的时间不同,对肌功能恢复的影响程度不同。本文通过动物试验从形态学角度观察骨骼肌失神经后不同时间的退变与再生变化。
1 材料与方法
1.1 实验动物及手术方法 见参考文献[1]。 1.2 实验主要试剂及设备 1.2.1常规HE染色及透射电镜样品制备试剂。 1.2.2NOVA超薄切片机(LKB公司)。 1.2.3JEM-2000EX透射电镜(日本生产)。 1.3 实验方法 1.3.1石蜡切片制备于动物手术后1、2、4、8、12和16周处死动物,取实验侧和对照侧腓肠肌原长固定于体积分数(φ)为10%的福尔马林液中12h,常规脱水,纵、横向石蜡包埋,5μm厚切片裱于清洁玻片上,常规HE染色,光镜观察。 1.3.2超薄切片的制备取1、4和12周组实验侧和正常腓肠肌中部肌肉,低温下切成1mm×1mm×1mm大小组织块各4块,立即固定于30g/L戊二醛溶液2~4h,10g/L锇酸后固定1~2h,逐级丙酮脱水,Epon812包埋,NOVA超薄切片机切片。JEM-2000EX透射电镜观察。
2 结 果
2.1 光镜下见正常肌组织肌纤维排列整齐,肌束间间隙小,有少量结缔组织,纵切片上可见肌纤维横纹清晰,肌核椭圆形,沿肌纤维长轴方向排列,大多在肌纤维边缘。肌纤维间可见成纤维细胞,肌核染色较成纤维细胞核染色淡。肌浆均匀分布。横切片上肌核位于肌纤维边缘。 切断神经后1周组,肌纤维大部分萎缩,纤维间间隙增大,胞浆染色变淡,肌核增加,形成核堆,核染色浓淡不均,仍可见肌纤维横纹,大部分肌核沿肌纤维长轴方向排列。 切断神经后2周组,可见肌纤维萎缩,部分肌纤维退变,横纹模糊或消失,胞浆淡染或不均匀,核增多,分布紊乱,形成核堆,替代退变肌细胞。少部分肌纤维仍可见横纹,肌纤维间结缔组织增多,少部分区域有脂肪浸润于肌纤维之间。 切断神经后4周组,大部分肌纤维萎缩,退变的肌纤维轮廓消失,核排列紊乱,部分核排列仍有方向性,可见核固缩和肿胀以及位于肌纤维中央的核,肌细胞胞浆少(图1)。 切断神经后8周组,肌纤维轮廓模糊,横纹消失,胞浆淡染,肿胀淡染的核增多,成串沿肌纤维方向排列,部分区域脂肪结缔组织浸润。 切断神经后12周组,肌纤维严重萎缩,几乎不见胞浆,各种形态的核成堆分布,染色不均,无正常形态的肌细胞。固缩核增多。脂肪组织浸润明显。 切断神经后16周组,部分肿胀的核染色极淡,分布紊乱,大量的核成串状分布。固缩的核亦较多。无明显脂肪浸润(图2)。 2.2 电镜下见正常肌肉肌原纤维排列整齐,Z线清晰,线粒体均匀分布在肌原纤维之间,排列规则,未见溶酶体。神经切断后1周肌原纤维排列基本整齐,线粒体增多,无明显肿胀。4周组线粒体明显增多肿胀,溶酶体增多,可见含不成熟的肌原纤维的细胞;12周有核位于细胞中央的细胞,胞浆内有不成熟肌原纤维,线粒体肿胀,被认为是再生的肌细胞退变,也可见未发生退变的再生肌细胞,核位于细胞中央,肌原纤维分布不规则(图3,4)。
责任编辑:姚红祥 |