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4. pGEM-BMP-2序列分析
①CAA GCC AAA CAC AAA CAG CGG AAG CGT CTT AAG TCC AGC TGC AAA AGG
②ACTGA
③Q A K H K Q R K R L K S S C K R
CAC CCT TTG TAT GTG GAC TTC AGT GAT GTG GGG TGG AAT GAC TGG ATC
CCT
H P L Y V D F S D V G W N D W I
GTG GCC CCT CCA GGC TAT CAT GCC TTT TAC TGC CAT GG G GAA TGT CCT TTT
TGGCCAC
V A P P G Y H A F Y C H G E C P F
CCC CTG GCT GAT CAC CTG AAC TCC ACC AAC CAT GCC ATA GTG CAG ACT CTG
TTTTTTG T
P L A D H L N S T N H A I V Q T L
GTA AAC TCT GTG AAT TCC AAA ATC CCT AAG GCA TGC TGT GTC CCC ACT
CTCTGTGA
V N S V N S K I P K A C C V P T
GAG CTT AGC GC A ATC TCC ATG TTG TAC CTA GAT GAA AAC GAA AAG GTTGTG
ACTTGCTCGT
E L S A I S M L Y L D E N E K V V
CTA AAA AAC TAT CAG GAC ATG GTT GTG GAG GGT TGT GGG TGT CGC TAG
TG
L K N Y Q D M V V E G C G C R
① 大鼠BMP-2 成熟肽编码区cDNA 序列
② 人BMP-2 A 成熟肽编码区cDNA 序列
③ 人BMP-2 A 成熟肽氨基酸序列（283 aa—396 aa）
*终止密码号
图1 UMR106细胞总RNA电泳图。可见明显的18S、28S RNA带。
图2 大鼠BMP-2 RT-PCR产物电泳图
1：DNA标尺：pBR322/HinfⅠ
2：RT-PCR扩增产物，363bp 带为大鼠BMP-2 cDNA片段
图3 重组质粒pGEM-BMP2酶谱分析
1：DNA标尺：pBR322/HinfⅠ
2：大鼠BMP2 PCR产物
3：pGEM-BMP2质粒BamHⅠ/Hind Ⅲ 酶切
讨 论
研究发现从不同种属动物骨基质中分离出的BMP［3］，具有跨种诱导成骨的能力， 一些动物来源的BMP已试用于临床研究［4］。但从动物骨基质中纯化BMP，因其含量 少而难于广泛应用于临床研究。随着基因工程技术的发展，多种动物BMP基因被克隆和测序 。现已发现BMP有十几个亚型，其中BMP-2具有较强的单纯成骨能力，可以利用基因工程技术 对其基因进行克隆和表达，制备出满足临床研究的BMP蛋白。
由序列分析结果可以看到，我们所获得的cDNA序列与大鼠BMP-2相应cDNA序列除终止密码前 第四 个密码子由TGC变成TGT外，其它序列完全相同，且该突变为中性突变不影响所编码的氨基酸 ；与人BMP-2A成熟区蛋白cDNA序列（283 aa—396 aa）比较，两者具有87%的同源性。根据 氨基酸编码碱基兼并性，推测两者编码的氨基酸序列完全相同。同时推测大鼠BMP-2成熟区c DNA基因表达产物可能与人BMP-2A无差别。本实验结果为进一步获得大鼠BMP-2蛋白成熟区表 达产物提供了前提条件。
［作者简介］ 张泽兵(1962～)，男，吉林省四平市人，病理教研室讲师，硕士，主要从事口腔肿瘤的分子生物学研究。
张泽兵（白求恩医科大学口腔医学院， 吉林 长春 130041）
高文涛（白求恩医科大学口腔医学院， 吉林 长春 130041）
欧阳喈（白求恩医科大学口腔医学院， 吉林 长春 130041）
参考文献
［1］ Wozney J M, Rosen V, Celeste A J, et al. Novel regulators of bon e formation: molecular clones and activities. Science 1988，242: 1528～1534
［2］ Riley EH, Lane JM, Uristt MRR， et al. Bone morphogenetic protei n-2:Biology and applications. Clin Orthop 1996，324:39～46
［3］ Bessho K, Tagawa T, Murata M. Comparison of bone matrix-derived b one morphogenetic proteins from various animals. J Oral Maxillofac Surg, 1992,50 :496
［4］ Hotz G, Herr G. Bone substitute with osteoinductive biomaterials- current and future clinical applications. Int J Orall Maxillofac Sury 1994,23:4 13
责任编辑：姚红祥 |