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【摘要】 目的 探讨白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1 ra)和白细胞介素-10(IL-10)在颞下颌关节紊乱病(TMD)病因及发病机理中的作用。方法 采用夹心法酶联免疫吸附测定法(Sandwich-ELISA)对31侧TMD患者及7侧 健康志愿者的关节液进行了IL-1ra和IL-10的检测。结果 健康志愿 者的滑液中不能检测到IL-1ra的存在，TMD患者的关节液中IL-1ra的平均水平为182.40 ±55.83pg/ml。TMD患者关节液的IL-1ra水平与健康志愿者滑液中IL-1ra水平之间的差 异具有显著性(P＜0.01)。颞下颌关节结构紊乱患者的IL-1ra水平为175.78± 52.43pg/ml(n=14)；TMJ骨关节病(OA)患者的IL-1ra水平为187.85±59.51pg/m l(n=17)；两者的差异不具有显著性。健康志愿者和TMD患者的滑液中均不能检测到IL-10的 存在。结论 IL-1ra和IL-10的缺乏或缺失在颞下颌关节紊乱病的病 因及发病机理中可能起着重要作用。
【关键词】 颞下颌关节 骨关节病 关节液 白细胞介 素-1 受体拮抗剂白细胞介素-10
骨关节病(Osteoarthrosis,OA)是一个以关节软骨和软骨下骨成份 降解与修复的正常平衡遭到破坏为主要特征的疾病过程［1］。在影响该疾病的诸多 因素中，细胞因子的作用引起了诸多学者的重视［2］。
白细胞介素-1(Interleukin-1,IL-1)是软骨细胞分解代谢的典型诱导剂，在软骨的吸收过程 中起着重要作用［3］。白细胞介素-1受体拮抗剂(Interleukin-1 receptor antagon ist,IL-1ra)是一种特异的受体拮抗剂，能够抑制IL-1α和IL-1β与IL-1 Ⅰ型及Ⅱ型受体的 结合。尽管在氨基酸序列上IL-1ra与IL-1β有30%的同源性，与IL-1α有19%的同源性，但是 它不具有内在的生物学活性。许多体外培养及实验动物的疾病模型中表明，IL-1ra具有拮抗 IL-1生物学效应的作用。所以，如果OA患者的关节中存在着IL-1ra，那么它很可能抑制局部 IL-1对软骨的破坏作用［4］。
白细胞介素-10(Interleukin-10,IL-10)主要由单核细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞和激活的 角化细胞产生。它是单核细胞或巨噬细胞功能的强力抑制剂，能够抑制单核细胞产生肿瘤坏 死因子α(TNFα)、IL-1、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12以及粒-巨集落刺激因子(GM-CSF)。另 外，IL-10能降低单核细胞Ⅱ型主要组织相容复合体(MHC)的表达，抑制一氧化氮(NO)合成及 前列腺素的产生。这表明，IL-10是一种重要的细胞因子抑制剂［5］。
本研究采用高敏感度、高特异性的夹心法酶联免疫吸附测定技术(Sandwich-ELISA)首次对IL -1ra和IL-10是否存在于颞下颌关节骨关节病(TMJ OA)滑液(SF)中进行了检测，以探讨IL-lr a和IL-10在TMJ OA的病因及发病机理中所起的作用；也将为OA的预防及治疗提供一定的理论 基础。
材料和方法
一、收集关节液：31侧颞下颌关节紊乱病SF取自北京医科大学口腔医院颞下颌 关节病诊治中心进行关节造影及关节镜手术的27例患者，7侧对照组关节液取自4名健康志愿 者。疾病分类标准采用马绪臣、张震康所提出的分类方法［6］。诊断依据临床检查 及X线检查结果(包括髁突经咽侧位片，许勒位片及关节造影检查)。全部病例均行常规关节 上腔穿刺，回抽无血后，注入2ml无菌生理盐水，连续注入、冲洗、回吸三次，获得关节冲 洗液1.0ml～1.8ml，离心(1000转/分，30分钟)后取上清，于-70℃冻存待测。
二、Sandwich-ELISA测定样品中IL-1ra和IL-10浓度：实验操作严格按照QuantikineTM Human IL-1ra (IL-10) Immunoassay Kit (R&D Systems,Inc,Minneapolis,MN,U.S.A,Ca talog Number DRA00,D1000)操作程序进行：首先将标准品进行溶解并倍比稀释。然后将预 备好的标准品、样品(共38侧关节的关节冲洗液，其中31侧为患者样品，7侧为健康对照样品 )用8道移液器移入预先包被有鼠抗人IL-1ra(IL-10)单克隆抗体的微孔板中，每孔200μl， 每个标准品、样品设两个重复孔：用不含标准品及样品的测定稀释液RD6G(RD6P)作为零对照 (两个重复孔)。室温下静置2小时，洗涤4次。随后，加200μl的酶标抗体(偶联辣根过氧化 物酶的抗IL-1ra和IL-10多克隆抗体)，室温下静置2小时，洗涤4次。接着，再加200μl的底 物溶液(过氧化氢和四甲基联苯胺)，室温下静置30分钟后加入50μl 2N H2SO4终止反应 ，30分钟内用ELISA阅读计(Bio-Rad,Richmond,CA,U.S.A)测光密度(OD)值(测定波长450nm, 参考波长570nm)。试剂盒的最低检测浓度小于22pg/ml(2pg/ml)。
责任编辑：姚红祥 |