【摘要】　目的　观察IL-1对髁状突软骨(Mandibular condylar cartilage,MCC)细胞增殖及凋亡的影响。方法下颌骨髁 状突软骨取自6只新生的日本大耳白兔，经机械分离及胰蛋白酶、胶原酶联合消化获得MCC细 胞。取第2代软骨细胞，培养过程中培养液中加入不同浓度(0.1μg/L、100μg/L)的IL- 1，采用相差显微镜、流式细胞术及透射电镜对髁状突软骨细胞生物学行为变化进行研究。 结果　IL-1在1μg/L～100μg/L范围内，呈剂量效应关系抑制髁状突 软骨细胞增殖，流式细胞术结果表明MCC细胞多数阻断于G0/G1期，S期细胞比例显著低 于对照组(P＜0.05)。同时10μg/L及100μg/L IL-1可显著诱 导细胞凋亡(凋亡率分别为59.47%及63.73%)，细胞收缩，形态变圆。电镜下观，胞 浆浓缩，染色质边集，粗面内质网扩张。结论　IL-1抑制MCC的细胞 增殖，诱导细胞凋亡的发生，可能是其在骨关节病发病中重要作用途径之一。
　　【关键词】　白介素-1髁状突　　软骨细胞　　增殖　　凋亡

　　在骨关节病(osteoarthrosis,OA)发生、发展过程中，细胞因子IL- 1、IL-6、TNF-α等均起着重要作用。目前研究表明IL-1作为OA的一种重要致病因子可诱导 软骨基质的丢失，抑制软骨细胞Ⅱ型胶原的表达［1，2］，并由此出现了一系列针对 抑制IL-1活性及其合成的治疗方法。但目前有关IL-1对髁状突软骨细胞生物学行为的影响报 道较少，进一步研究IL-1的作用机理对骨关节病、软骨损伤的发病机理研究及寻找有效的治 疗措施具有重要意义。本研究利用体外培养兔髁状突软骨细胞，观察了IL-1对其生长、增殖 动力学的影响。

材料和方法

　　1.髁状突软骨细胞分离培养：参见文献［3，4］方法，髁状突软骨取自6 只新生日本大耳白兔，无菌条件下切取双侧髁状突。含双抗PBS冲洗并剥离软骨，反复剪切 至1mm3大小。首先进行2.5g/L胰蛋白酶消化30min，离心弃消化液，加入2g/L Ⅰ型胶 原酶(Sigma,USA)，37℃震荡消化1～2小时。显微镜下控制消化时间，及时收集细胞，接种 于DMEM(Gibco,USA)培养基，内含10%小牛血清，常规条件下培养。
　　2.IL-1对髁状突软骨细胞生长的影响：取处于对数生长期的第二代兔髁状突软骨细胞，经 2.5μg/L胰蛋白酶消化制成单细胞悬液。用DMEM培养基调整细胞浓度为1×105/ml，定 量接种于96孔板。待24小时细胞贴壁后，更换不含血清的DMEM培养基培养24小时，使细胞相 对同步化。取两张接种有细胞的96孔板，吸出无血清培养基，分别加入由含质量分数为0. 4%小牛血清DMEM配制的各种浓度(0.1μg/L、1μg/L、10μg/L、100μg/L)的IL-1(军 事医学科学院产品)。对照组不加IL-1。每个样本设6个复孔。继续培养72小时，终止实验前 4小时，每孔加入20μl MTT，再培养4小时，弃去培养液，每孔加入150μl DMSO，振荡溶解 10min，于Bio-Tek E1312E(USA)酶标光度仪595nm波长下测定各孔的吸光度值(A值)。
　　3.IL-1作用下的细胞增殖动力学变化的流式细胞术测定：将第二代兔髁状突软骨细胞调整细 胞密度为1×108/L，定量接种于T50ml培养瓶。待细胞贴壁后，更换无血清DMEM培 养基培养24小时，使细胞相对同步化。更换含IL-1的培养基，继续培养48小时，胰蛋白酶消 化、收集细胞，用无Ca2+、Mg2+的PBS洗涤二次，移入离心管中，离心，去上 清，保留约0.5ml的PBS，用加样器将混匀的细胞悬液喷射入5ml 4℃预冷的体积分数为 0.75(或75%)乙醇中，4℃冰箱过夜。将各样品液离心，加入含1g/L RNase的PBS，37℃ 水浴30min。无Ca2+、Mg2+的PBS洗涤二次，调整细胞密度为1×109/L，加 入1ml碘化吡啶(PI)染色液，上机检测。应用专用的DNA拟合软件处理数据后获得细胞的DNA 含量、周期(G0/G1期，G2/M期，S期)分布及凋亡情况并根据公式：增殖指数测定细胞增殖指数。
　　4.IL-1对兔髁状突软骨细胞超微结构的影响：细胞培养、接种同上，实验组培养基含(10μg /L IL-1)，培养48小时，PBS洗涤二次，瓶内留少量PBS，使用细胞刮将细胞脱离瓶壁，移入 离心管中，离心，去上清加入4℃预冷的4%戊二醛固定，按常规透射电镜细胞样本制备，Hitachi-600透射电镜观察。

责任编辑：姚红祥