2.2　X线摄片
　　复合物皮下植入标本均见X线阻射影，有明显成骨现象。4周时以周边成骨为著，中央有少量成骨。8周时中央亦有明显成骨现象。单纯骨基质皮下植入标本4周时，透光度与周围软组织相似，成骨作用不明显。8周时，边缘有局灶性密度增高影像，提示有少量成骨。
2.3　组织学观察
　　术后4周，大体观察可见复合物标本硬度明显高于对照组。镜下见复合物表层有类骨组织和新骨形成，成骨细胞较多，兼有纤维成骨和软骨成骨特征（图1）。后者表现为软骨细胞增生、肥大，软骨形成及软骨内骨化。复合物内层亦有散在局灶性编织骨形成。总体观察以纤维成骨为主。单纯骨基质标本仅见少量软骨样组织，提示为软骨成骨早期。

图1　术后4周成骨情况(HE ×40)

　　术后8周，大体观察复合物标本硬度增加，明显高于对照组。镜下见复合物表层及中心部均有新骨形成，以纤维成骨为主（图2）。单纯骨基质标本仅见少量新骨形成，仍为软骨成骨。

图2　术后8周成骨情况(HE ×40)标本切片见骨组织形成

3　讨　论
　　组织工程是近年来兴起的一项新技术，其核心包括支架材料和细胞两方面。理想的组织工程支架材料应具有生物相容性、生物可降解性、多孔性等特点，以利于细胞粘附、生长、增殖和分化，并形成功能性组织。由于异体松质骨基质具有良好的骨诱导作用和组织相容性，并且具有多孔网状结构，因此有可能成为自体细胞植入的支架。实验结果显示，含骨髓基质成骨细胞的复合物异位成骨作用明显优于单纯骨基质，且随时间延长骨组织形成量增加。从而证实了松质骨基质作为骨组织工程支架材料的可行性。骨组织由外层向内层逐渐形成，这可能与外层细胞获取营养物质充分及某些因子作用有关。
　　骨髓细胞中含有基质干细胞，可以分化成为成骨细胞。陈富林等〔6〕体外培养骨髓细胞证实其具有体外成骨能力。由于骨髓细胞取材简单，临床上可以通过穿刺获得，创伤小，可反复进行，培养周期短，因此已成为骨组织工程研究中较常用的骨源细胞。我们采用骨髓细胞作为骨源细胞，并体外诱导使其向成骨细胞转化，与松质骨基质复合后，皮下成骨作用明显。同时，以往文献中，骨髓细胞与材料复合方法较多，但是多数方法中骨髓细胞仅贴附于材料表面。我们采用凝胶类材料藻酸盐作为骨髓细胞与松质骨基质复合的载体，采用混匀-接种-固化技术，使骨髓基质成骨细胞充分渗入材料内部。研究结果证实，复合物中央部可见骨组织形成。
　　松质骨基质/骨髓基质成骨细胞复合物异位成骨作用明显，提示松质骨基质可以作为骨髓成骨细胞的良好载体，它不仅保持脱矿骨基质的活性，而且具有多孔网状结构，可以成为一种良好的骨组织工程支架材料。

本项目由国家自然科学基金(编号 39779762)
军队医疗卫生基金(编号98M104)资助
作者单位：西安第四军医大学口腔医学院 710032

参考文献

1Urist MR. Bone:Formation by autoinduction,Science. 1965,150:893
2 杨维东,丁鸿才,马振国,等. 异体脱矿骨移植的抗原性研究. 实用口腔医学杂志,1991,7(3):131
3 杨维东,马振国,彭品祥,等. 异体脱矿骨移植修复创伤性眶底缺损. 实用口腔医学杂志，1994,10:175
4 孙沫逸,丁鸿才,毛天球,等.同种异体骨基质明胶异位诱导骨形成.华西口腔医学杂志,1991,9(4):254
5 Cheng SL, Yang JW, Rifas L,et al. Differentiation of human marrow osteogenic stromal cells in vivo:Induction of the osteoblast phenotype by dexamethasone. Endocrinology, 1994,134:277
6 陈富林,毛天球,马秦,等.骨髓细胞体外成骨能力的实验研究. 华西口腔医学杂志,1998,16(3):207

责任编辑：姚红祥