结　果

　　1. 兔舌左右侧对照试验：
　　对照侧：不带有pBlacZ质粒的缝线组织经 x-gal染色后不出现蓝绿色(见图1); 试验侧：带有pBlacZ质粒的缝线组织经x-gal染色后出现蓝绿色，并以分子外科缝线为中心形成近似圆形的蓝(见图2)。

　　图1　不含pBlacZ质粒的分子外科缝线的兔舌肌经x-gal染色后结果(×20)

　　图2　含pBlacZ质粒的分子外科缝线的兔舌肌经x-gal染色后结果(×20)

图3　人工智能与图象处理分析

　　2. 正交试验设计分析
　　照片由惠普扫描仪输入后，经华中科技大学人工智能与图像处理国家重点实验室分析处理(见图3)，获得各组切片的蓝点数（C）和总点数（p）及平均蓝染率(见表2),采用SAS统计分析软件系统分析试验结果表明：4周、1／0缝线、经盐酸布比卡因麻醉可获得最高的基因表达效率，为临床最优组合。

讨　论

　　基因免疫产生于基因治疗的研究过程中，1990年Wolff对鼠的股四头肌直接注射纯化的重组DNA质粒（含氯化乙酰转移酶、虫荧光素酶和半乳糖苷酶基因），发现在肌肉细胞中表达了上述基因［1］，随后在1991年对鼠的心肌注射重组质粒DNA（含α-肌浆球蛋白的重链基因）后在心肌中检测到了该基因表达，表明在股四头肌或心肌中直接注射DNA质粒可表达相应的外源性基因, 1993年，Ulmer将含编码流感病毒核心蛋白基因序列的质粒载体，直接肌肉注射导入小鼠，使其获得了保护性的免疫应答，该研究结果发表于当年的《Science》杂志上［3］，被称为开创了基因治疗的新纪元，带来了第三次疫苗革命。
　　舌肌属横纹肌，又因位置表浅，操作和观察均较方便而成为基因治疗的一个良好的靶位点。迄今为止的公开报道中有二项以舌肌为靶位点，一项是Conry等开展的用含癌胚抗原(CEA)的多聚核酸疫苗以肌肉注射入舌肌的方法免疫5只6-8周龄的C57BL/6小鼠［4］，免疫方案为每3周1次，每次用200ug质粒DNA，共3次，在最后1次肌注免疫接种后处死小鼠，收获血清及脾细胞进行免疫检测，结果5只小鼠中3只的淋巴母细胞转化试验阳性，2只淋巴因子释放试验阳性，均检测到抗-CEA的特异性抗体，表明舌肌注射癌胚抗原多聚核酸疫苗可产生特异性的细胞和体液免疫反应.另一项以舌肌为靶位点的研究由C.Shuler等人开展［5］，他们建立了直接注射质粒DNA于鼠舌肌中的动物模型，以氯化乙酰转移酶（CAT）基因，虫荧光素酶（luciferase）基因和β一半乳糖苷酶（lacZ）基因为报道基因，研究了不同启动子、不同质粒DNA注射量与基因表达效率之间的关系，结果表明质粒DNA注射量与基因表达效率之间存在剂量依赖关系，同时再次证明鼠舌肌是一个优良、方便的转基因动物模型。
　　分子外科缝线与临床关系密切，因而确定影响相应基因表达效率的临床因素至关重要，研究表明，基因转染后4周基因表达效率优于1周，这可能与基因表达需要一个过程和基因表达产物在体内不断累积有关，同时，基因转染采用1／0缝线基因表达效率优于5／0缝线。这是因为：①　1／0缝线直径较粗，在形成分子外科缝线时可携带更多的质粒，可有较多供转染的质粒DNA；②　1／0缝线与肌肉组织接触面大，能接触更多的舌肌细胞，因而能转染更多的舌肌细胞。
　　布比卡因为长效、强力局部麻醉药物，持续时间为利多卡因的2倍，一般可达6h以上，麻醉强度是利多卡因的3－4倍，布比卡因可使肌肉组织处于再生状态（regenerating muscle）［6］，大大提高了 DNA 导入效率，其促进肌肉组织摄取质粒的机制可能与以下因素有关：①　再生状态的肌肉DNA吸收和分布均匀，DNA导入效率高；②　成熟肌肉组织具有厚的基底膜，妨碍DNA的吸收，再生状态的肌肉组织缺乏基底膜，有利于DNA的吸收；③　再生肌肉组织，在早期富含巨噬细胞，树突状细胞等抗原呈递细胞（APC）；④　再生肌肉纤维表面MHC Ⅰ类分子表达增加，细胞因子含量也较高。

责任编辑：姚红祥