［摘要］　目的：观察三叉神经痛患者痛支与非痛支神经纤维中降钙素基因相关肽的含量变化，加深对三叉神经痛发病机理的认识。方法：用免疫组织化学法观察16例患者痛支与非痛支神经纤维组织中降钙素基因相关肽免疫反应阳性颗粒的差异。结果：发现痛支神经组织中降钙素基因相关肽免疫反应阳性颗粒的数量、面积均显著多于、大于非痛支神经组织中的降钙素基因相关肽免疫反应阳性颗粒。结论：我们认为：三叉神经痛的痛支神经过度合成和释放降钙素基因相关肽可能促进了SP的释放，导致阵发性剧烈疼痛，并在局部形成神经源性炎症。
［关键词］　三叉神经痛；　降钙素基因相关肽；　免疫组织化学

　　降钙素基因相关肽(Calcitonin gene-related peptide, CGRP)是1983年人类首次用分子生物学方法发现的一种由降钙素基因表达的新神经肽，广泛分布于神经、心血管、消化、呼吸、内分泌等系统，参与机体许多功能的调节。由于CGRP与速激肽作为伤害性刺激的递质或调质共存于感觉神经元中，因此在有关疼痛的研究中引起了人们高度重视。目前的研究［1］证实三叉神经痛发作时局部却有CGRP的参与，为了进一步研究CGRP与三叉神经痛的发病关系，我们用免疫组织化学法首次观察了16例三叉神经痛患者痛支与非痛支神经纤维组织中降钙素基因相关肽免疫反应阳性颗粒的差异，并就其临床意义进行初步探讨。

材料和方法

　　一、临床资料
　　随机抽取16例长征医院口腔科同期住院三叉神经III支中某一支痛的患者,如仅下牙槽神经痛或颊神经痛或舌神经痛的患者。其中男7例，女9例，年龄46-82岁，平均年龄60.5岁；左侧6例，右侧10例，下牙槽神经痛11例，舌神经痛3例，颊神经痛2例；病程6-22年，平均10.6年。入院前所有患者均未作过手术、射频及封闭治疗，入院后均行三叉神经颅底高位切断术［2］。
　　二、采样方法
　　术中快速切取一段神经组织放入10%福尔马林固定液内，以避免人为造成的创伤给检测结果带来误差，取样部位为痛支和非痛支两处，均在第III支范围内，非痛支作为对照。标本固定后石蜡包埋、切片，片厚4μm。
　　三、 标本制备
　　用ABC法［3］行免疫酶组织化学标本制备，具体步骤如下：切片脱蜡至水。 PBS液洗一遍，3min 。PBS液内用微波修复抗原1min。 PBS液洗三遍，每次3min。0.3%过氧化氢甲醇封闭过氧化物酶，室温下20min。PBS液洗三遍，每次3min。用1:10小牛血清封闭非特异性抗原，室温下20min。加CGRP第一抗体(1:100，DaKo公司)，4℃冰箱内过夜。 PBS液洗3遍，每遍3min。加生物素化第二抗体(IgG) (1:100，DaKo公司)，37℃下45min。PBS液洗3遍，每遍3min。加ABC复合物(1:200，DaKo公司)，37℃下45min。PBS液洗3遍，每遍3min。0.05%DAB+0.03%H2O2显色5min，免疫反应阳性颗粒呈棕色。流水洗，苏木素复染细胞核。脱水、透明、封片、镜观。
　　四、 观察方法
　　用高清晰度彩色病理图文分析系统(型号: HPIAS－1000 )分别对CGRP免疫反应阳性颗粒的数量、面积、平均光密度和平均面积进行定量分析。操作方法如下：将染色后的切片置于显微镜下，选择切片空白区校正并调整光源和灰度，每张切片随机选择不重叠的10个视野；对所测物质准确定位后，通过摄像机将被测物的各种信息转换成数字图像，传送到主机系统，对神经纤维中的免疫反应阳性颗粒进行二值化处理和图像修正，由主机系统自动计算出CGRP免疫反应阳性颗粒的数量、面积、平均光密度和平均面积。从数量、面积、反应强度三个不同侧面间接反映痛支与非痛支神经纤维中CGRP的含量。所获数据按配对计量资料作t-检验。
　　五、统计方法
　　用配对资料的t-检验。

结　果

　　神经组织中CGRP免疫反应阳性颗粒呈棕色或棕褐色，颜色深浅不一；颗粒大小不等，形态为圆形、卵圆形及不规则形。痛支与非痛支CGRP免疫反应阳性颗粒的数量、面积、平均光密度和平均面积见表1。经成对双样本均值t-检验分析，痛支神经纤维CGRP免疫反应阳性颗粒的数量明显多于非痛支，且相差非常显著（ P<0.01）；痛支神经纤维CGRP免疫反应阳性颗粒的面积显著大于非痛支（ P<0.05）；而痛支与非痛支神经纤维CGRP免疫反应阳性颗粒的平均光密度和平均面积相差均不显著（P>0.05）。

责任编辑：姚红祥