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【摘要】 目的 研究人重组白细胞介素1 (recombinant human interleukin -1，rhIL-1)和氟美松对髁突软骨细胞合成6-酮-前列腺素F1α的影响。方法 在加入rhIL-1及氟美松后4、8、12、24和72 h，应用放射免疫方法检测髁突软骨细胞培养液内6-酮-前列腺素F1α的浓度。结果 空白对照组在4、8、12、24和72 h时，髁突软骨细胞培养液内6-酮-前列腺素F1α的浓度分别为1 516.49ng/L、1 513.22ng/L、1 506.76ng/L、1 526.79ng/L和2 114.36ng/L；加入rhIL-1组，4 h时为1 664.32ng/L，显著高于空白对照组(P<0.01)，8、12、24和72 h时分别为1 146.11ng/L、949.24ng/L、1 392.33ng/L和1 481.98ng/L，均显著低于空白对照组(P<0.01)。同时加入rhIL-1和氟美松及单纯加入氟美松组，所有时间点均比空白对照组显著降低(P<0.01)。结论 白细胞介素1使髁突软骨细胞合成前列腺素增加；氟美松使之合成减少，并可抑制白细胞介素1的活性。
【关键词】 白细胞介素1 地塞米松 6-酮-前列腺素F1α
前列腺素合成增加是导致骨关节病时关节软骨破坏的重要原因之一［1］。国外对膝关节软骨细胞的研究表明，白细胞介素1(interleukin-1, IL-1)使其合成前列腺素增加［2］，糖皮质激素使其合成减少［3］。我们研究了rhIL-1和氟美松对体外培养的兔髁突软骨细胞合成前列腺素的影响，以探讨颞下颌关节骨关节病的发病机制和相关药物治疗的理论依据。
材料和方法
一、髁突软骨细胞的培养
根据作者曾报道的髁突软骨细胞培养方法［4］，取出生后24 h内的日本大耳白兔6只(中国农科院动物所提供)，分离其髁突软骨细胞。将分离的软骨细胞接种于96孔培养板内，每孔细胞数为7×105个。加入含10％胎牛血清(foetal bovine serium， FBS，中国医科院血液所提供)的DMEM培养基(美国Gibco公司生产)500μl，于37℃、含5％CO2的饱合湿度空气中培养。
二、实验方法
1.分组：待接种于培养板内的软骨细胞生长至60%～70%满底时，吸去培养基，用PBS(pH 7.4)冲洗3次，每次5 min，分成下列4组，每组10孔：第一组(空白对照组)：加入含10％FBS的DMEM培养基500μl；第二组：加入含10％FBS的DMEM培养基487.5μl、rhIL-1 12.5μl(5ng)(北京医科大学免疫学教研室提供，基因重组大肠杆菌表达产物，制备性SDS-PAGE电泳纯化，纯度>95%，活性: 1×1013IU/g，用含10%FBS的DMEM培养基稀释后-70℃保存备用)； 第三组：加入含10％FBS的DMEM培养基462.5μl、rhIL-1 12.5μl(5ng)、氟美松25μl(50μg)(华北制药厂生产)；第四组：加入含10%FBS的DMEM培养基475μl、氟美松 25μl(50μg)。
2.取样:各实验组分别于加入实验药品(空白对照组单纯加入DMEM培养基)后4 h收集细胞培养液，用PBS(pH7.4)冲洗3次(每次5 min)后每孔分别加入含10％FBS的DMEM培养基500 μl；再分别于加入实验药品后8、12、24和72 h收集细胞培养液，每次收集后均用PBS(pH 7.4)冲洗3次，每次5 min，再加入含10％FBS的DMEM培养基500μl。收集的样本于-70℃下保存、待测。
3.检测6-酮-前列腺素F1α：应用125Ⅰ-标记6-酮-前列腺素F1α放免试剂盒(解放军总医院东亚免疫技术研究所提供)，检测收集的细胞培养液内6-酮-前列腺素F1α的浓度，试剂盒最小检出值小于25 μg/L，对其他花生四烯酸代谢交叉反应小于0.1%。
4.统计方法：分别用t检验和方差分析比较同一时间和不同时间各实验组之间6-酮-前列腺素F1α浓度的差异。
结果
体外培养的髁突软骨细胞在不同时间、不同实验药品作用下合成6-酮-前列腺素F1α的变化见附表。
由附表中可见，单纯加入rhIL-1(10μg/L)组4h时髁突软骨细胞培养液内6-酮-前列腺素F1α的浓度显著高于空白对照组(P<0.01)，8、12、24和72 h时均显著低于空白对照组(P<0.01)。同时加入rhIL-1(10μg/L)和氟美松(100 mg/L)组及单纯加入氟美松(100 mg/L)组，加入实验药品后所有时间点的细胞培养液内6-酮-前列腺素F1α的浓度均显著低于空白对照组(P<0.01)；72 h 时显著高于单纯加入rhIL-1组(P<0.01)，4、8、12、24和72 h时均显著低于单纯加入rhIL-1组(P<0.01)。
责任编辑：姚红祥 |