〔摘要〕　目的：研究在体内情况下咬合力影响牙周组织改建的分子机制 。方法：采用拔牙法拔除大鼠一侧上颌磨牙，建立模拟下颌磨牙咬合力丧失及增强的动物模型。选择某一特定细胞因子(IL-6)用于免疫组化、原位杂交实验中鉴定，且行组织形态学观察（HE染色）。结果：免疫组化以及原位杂交结果显示，IL-6蛋白及IL-6 mRNA表 达在咬合力增强组及减弱组 均较正常咬合力组明显改变。组织形态学观察表明，咬合力增强及减弱对牙周组织改建的影 响与正常咬合力明显不同。结论：通过拔除大鼠一侧上颌磨牙建立 的动物模型，达到较好地模拟咬合力丧失、增强的目的。此动物模型有效、可靠。
关键词　动物模型； 咬合力；牙周组织

　　口腔修复临床观察到，咬合力减弱时，牙周组织发生退行性变，牙槽骨骨小梁吸收 ，骨应力线不明显。咬合力增强，如在生理限度内，可见骨应力线增强；如超出生理限度， 出现骨小梁吸收，骨应力线不明显。此现象说明作用于牙上的咬合力可传递至牙周组织引起 其改建。
　　力与牙周组织改建关系的研究，以往一般采用体外实验进行。但要弄清咬合力如何影响 牙周组织改建的分子机制就必须采用体内实验的方法，必须建立模拟不同咬合力状态的动物 模型用于多方面的实验研究以探索其机制。

1　材料和方法

1.1　动物模型的建立
　　选用80只体重为(250±20) g的成年雄性Wistar大鼠，随机等量 地分为对照组和实验组。实验组拔除左侧上颌(B区)所有磨牙使左侧下颌(D区)磨牙丧失对 颌牙导致咬合力丧失(为实验1组)，而对侧下颌(C区)磨牙功能代偿性增强，所受咬合 力增大(为实验2组)；对照组未作处理，因此咬合力正常。所 有动物均定 时、定量摄食，自由饮水。两组动物分别在实验后6 h,1、2、3 d,1、2、3、4周各处死5 只，共16组。
1.2　组织标本制备
　　实验动物采用40 g/L多聚甲醛心内灌注的方式行内固定，取出下颌 骨，仅保留磨牙区骨段，置于40 g/L多聚甲醛中再固定6 h。将标本移至脱钙液（含0.7 g /L EDTA，8 mg/L酒石酸钠钾，0.14 g/L酒石酸钠，99.2 ml/L HCl）中保存2周。梯度乙醇 脱水，石蜡包埋。组织切片厚度为5 μm，裱于经硅化处理的玻片上。
1.3　组织形态学
　　取相应切片进行苏木素-伊红（HE）染色，在光学显微镜下观察牙周 形态变化，并用显微标尺对牙周膜宽度进行测量。每个标本选第一磨牙牙根为观察对象，近 、远中侧牙周膜根中1/3区各取3处进行测量，取平均值，结果用t检验进行统计学分析 。
1.4　免疫组化
　　取相应切片按常规免疫组化ABC法染色，观察细胞因子IL-6在咬合力 影响大鼠牙周组织改建中的作用。同时设不加一抗的阴性对照组。
1.5　原位杂交
　　取相应切片，采用IL-6寡核苷酸探针进行原位杂交，研究不同咬合力 影响大鼠牙周组织改建过程中IL-6 mRNA表达的变化。

2　结　果

2.1　组织形态学
　　采用此模型制备的组织切片，进行HE染色。组 织形态学观察到对照组大鼠牙周膜结构致密，纤维、细胞排列有序，成纤维细 胞胞核的方向与之一致。牙槽骨骨壁较平，表面衬以连续排列的扁平成骨细胞（图1）。实验2组2周时牙周膜宽度明显增加 ，牙周膜结构致密。其纤维、细胞排列 有 序。牙槽骨骨壁凹凸不平，有活跃的骨吸收陷窝（其内可见破骨细胞），同时可见交替出现 的骨形成区，成骨细胞胞核较大。3周、4周时，牙周膜与2周时比无明显变化；牙槽骨骨壁 较平，骨形成区更加明显，破骨细胞数量大大减少（表1、图2）。
　　实验1组2周时牙周膜结构稀疏，纤维、细胞的排列明显紊乱。牙槽骨骨壁凹 凸不平，有很多骨吸收陷窝，其内可见破骨细胞。3周、4周时，牙周膜结构更加紊乱，牙槽 骨中的破骨细胞数量减少（表1、图3）。

表1　实验组和对照组不同实验时间牙周膜宽度差值表（单位：10-2 mm）
 

	对照组 (正常咬合力)	实验1组				实验2组
		1周	2周	3周	4周	1周	2周	3周	4周
近中侧	9.1±1.1	8.3±1.0	7.5±0.9①	7.3±0.9①	7.2±0.8①	9.6±0.9	11.0±1.0①	11.6±1.0①	11.9±1.1①
远中侧	7.9±0.6	7.0±0.8	6.2±0.7①	6.1±0.7①	6.0±0.7①	8.0±0.8	9.1±0.8①	9.5±1.0①	9.9±0.9①

责任编辑：姚红祥