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【摘要】 目的 比较昼夜不同时段戴用功能矫治器 后，髁突软骨增殖细胞核抗原(PCNA)表达的昼夜变化，为探讨功能矫治昼夜最佳介入时段， 提供直接实验依据。方法 采用免疫组织化学法，检测不同时段前伸 大鼠下颌后，髁突软骨PCNA表达的昼夜变化。结果 戴用功能矫治器 后，PCNA表达强度增加；白天戴用组明显高于夜晚组。结论 功能矫 治器可以刺激髁突软骨增生；在髁突软骨昼夜自发性生长最旺盛时段戴用矫治器，效果最佳 。
【关键词】 颞下颌关节 功能矫治器 昼夜节律 细胞 增殖核抗原
大鼠牙齿生理性萌出昼夜节律的研究［1］及刘大为［2 ］等的实验研究，证实了大鼠正畸牙移动最佳时段(7：00～9：00)的存在。大鼠髁突软骨 细胞有丝分裂存在昼夜节律也已被证实［3］，但这一节律与功能矫治昼夜最佳介入 时段之间的关系尚未见报道。本实验通过功能矫治器前伸大鼠下颌的动物模型，运用免疫组 织化学技术，以能有效反映细胞增殖功能的增殖细胞核抗原(PCNA)为指标，研究在一天中的 不同时段戴用同一功能矫治器时，PCNA表达的昼夜节律变化特征。由此推断出最能刺激髁突 生长改建的最佳戴用时段，以指导临床。
材料和方法
选用72只4周龄雄性SD大鼠(体重90g左右)，随机等量分为对照组、白天组、夜 晚组(表1)，光照时间为8：00～20：00点。仿临床上颌斜面导板式功能矫治器配戴时段：白 天组8：00～20：00点(髁突软骨细胞昼夜自发性增殖活跃时段)，夜晚组为20：00至次日8： 00(髁突软骨细胞昼夜自发性增殖低谷时段)，对照组不戴矫治器。实验周期为7d，第8d开始 ，按分小组所设时点处死大鼠，取右侧髁突，用免疫组织化学方法检测各组各样本的髁突软 骨PCNA(PCNA单克隆抗体为丹麦PaKo公司产品)表达状况(见图1～6)。先将所测各时点PCNA阳 性细胞(阳性细胞标准：细胞核形态完整，棕黄色颗粒特异性定位于细胞核内)标记指数(LI) 标记在以时间为横坐标、LI为纵坐标的坐标系内，观察、比较其走势。然后把全部LI值按时 点顺序输入计算机，应用单余弦分析软体以判断其是否合乎节律特征，同时用Bingham余弦 参数分析软件比较各组间差异［4］。
表1 实验动物分组设计表(只)
| |
0：00 |
4：00 |
8：00 |
12：00 |
16：00 |
20：00 |
| 对照组 |
4 |
4 |
4 |
4 |
4 |
4 |
| 白天组 |
4 |
4 |
4 |
4 |
4 |
4 |
| 夜晚组 |
4 |
4 |
4 |
4 |
4 |
4 |
图1 对照组PCNA表达（峰值相位）标记强度
图2 对照组PCNA表达（谷值相位）标记强度
图3 白天组PCNA表达（峰值相位）标记强度
图4 白天组PCNA表达（谷值相位）标记强度
图5 夜晚组PCNA表达（峰值相位）标记强度
图6 夜晚组PCNA表达（谷值相位）标记强度
结果
1.按坐标法定点的各组曲线走势与自然状态下大鼠髁突软骨PCNA表达存在昼夜节 律相似，白天组、夜晚组PCNA表达的变化曲线，也呈余弦波形样。但白天组各时点LI值均高 于夜晚组(图7)。
图7 各组大鼠髁突软骨PCNA表达昼夜变化
2.各组PCNA表达拟合余弦曲线情况：经用时间生物学微观分析法中的单余弦法分 析、检验，白天组、夜晚组髁突软骨PCNA表达的昼夜变化，也符合昼夜节律，表明功能矫治 器的戴用，并未使髁突软骨原有的细胞增殖内节律消失(表2)。
表2 各组大鼠髁突软骨细胞PCNA表达拟合余弦曲线
| 组别 |
概率 |
调整中值
(MU/103g.L) |
振幅
(95%标准误) |
峰值相位(90%CI) |
| 度 |
时间 |
| 对照组 |
＜0.01 |
2.288±0.088 |
0.573±0.126 |
-184 |
12：14 |
| 白天组 |
＜0.01 |
5.182±0.117 |
1.781±0.165 |
-210 |
14：01 |
| 夜晚组 |
＜0.01 |
3.533±0.115 |
1.344±0.163 |
-193 |
12：53 |
| 3.各组间曲线比较：与自然状态下髁突软骨的PCNA表达状况相比，无论是白 天组或夜晚组，均与之存在非常显著性差异，即功能矫治器有明显的促髁突软骨细胞增殖效 果，而白天组的促增殖效果又明显优于夜晚组(表3)。
表3 各组曲线间的比较 |
责任编辑：姚红祥 |