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【摘要】 目的 了解雌激素受体（estrogen receptor, ER）与髁突软骨增生、分化及适应性生长改建的关系，探讨功能矫形治疗的机理。方法 选用50只4周龄的雌性SD大鼠，分为实验组和对照组。实验组大鼠配戴自制功能性矫治器引导下颌前伸，应用葡聚糖-活性炭吸附法（DCC法）对髁突软骨中ER进行了检测和分析。结果 大鼠髁突软骨中存在雌激素受体，且髁突软骨增生旺盛期时受体含量较高，而分化期时含量较低；功能矫形前伸下颌后，髁突软骨中ER含量明显增加。结论 雌激素受体与髁突软骨的增生、分化及功能矫形后的适应性生长改建关系密切。本项研究证实了髁突软骨中存在雌激素受体的作用机制并进一步阐明了功能矫形治疗的机理。
国外学者的实验结果表明，雌激素与原发性软骨的增生、分化及代谢有着密切的关系［1，2］。雌激素必须通过与细胞内的特异性受体，即雌激素受体（estrogen receptor, ER）结合后才能最终发挥其生物学效应。因此，受体的数量及功能状态与其生物效应的大小密切相关。Rosner等［3～7］在原发性软骨中证实了ER的存在。而以往对髁突软骨等继发性软骨中ER的研究较少，仅个别学者对狒狒髁突软骨中的ER进行过初步研究［4,8］。
本项研究拟用葡聚糖-活性炭吸附法（dextran-coated charcoal method, 简称DCC法）对大鼠髁突软骨中的ER进行定量检测与分析，观察髁突软骨中ER与其增生、分化及功能矫形前伸下颌后适应性生长改建的关系，对功能矫形治疗的机理进行深入探讨。
材料和方法
一、实验设计
选用4周龄的雌性SD大鼠50只，随机等量地分为实验组和对照组。实验组动物戴自制的上颌斜面导板式功能矫治器引导下颌前伸，对照组不戴矫治器。于实验后的3天、1周、2周、3周及4周分别将动物处死，取其右侧的髁突软骨，用冰生理盐水洗净，置于冰壶中送检，进行ER的DCC法检测和分析。
二、矫治器的设计
自制上颌斜面导板式功能矫治器，由上切牙冠套、斜面导板和辅助固位装置3部分组成，斜面导板与上颌平面成20～25°角，矫治器有两对固位臂，通过橡皮圈将矫治器固位于鼻上颌复合体。大鼠闭颌时下切牙咬在斜面导板上，有引导下颌前伸的作用。
三、髁突软骨ER的DCC法测定
1.主要试剂：3H-E2（3H雌二醇)（比放4 884 GBq/mmol），3H-R5020（比放3 219 GBq/mmol）、活性炭等。
2.样品处理及测试程序：
(1)实验样品用分析天平称重。
(2)样品匀浆制备，离心，取上清液。
(3)蛋白含量测定：用紫外分光光度法，控制蛋白含量在1 μg/L以上。
(4)结合反应：分别以3H-E2按20nm、10nm、5nm、2.5nm、1.5nm配制，冷室中孵育8～12小时，使其充分结合。
(5)终止反应：加活性炭0.2ml终止结合反应，吸附未结合的激素。
(6)闪烁计数：液体闪烁自动计数仪（Beckman 9800型 β计数仪）检测并打印结果。ER的计量单位为fmol/mg.protein。
结果和分析
一、实验组与对照组动物髁突软骨ER含量的测定结果见附表。
附表 实验动物分组与髁突软骨ER含量的测定结果
(fmol/mg.protein)
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实验
时间 |
实验组 |
对照组 |
t值 |
P值 |
|
例数 |
测量值 |
例数 |
测量值 |
|
3天 |
5 |
8.20±4.49 |
5 |
8.06±4.18 |
0.51 |
>0.05 |
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1周 |
5 |
16.24±3.45 |
5 |
12.74±2.08 |
1.94 |
<0.05* |
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2周 |
5 |
30.20±4.32 |
5 |
20.60±6.49 |
2.75 |
<0.05* |
|
3周 |
5 |
22.04±2.65 |
5 |
18.08±3.31 |
2.09 |
<0.05* |
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4周 |
5 |
12.34±2.00 |
5 |
10.72±1.26 |
1.26 |
>0.05 |
注：*差异有显著性
二、测定结果分析
1.对照组：在5个实验时间中，髁突软骨ER的含量以2周和3周组为最高；而1周组又高于3天和4周组，其间差异有显著性（P＜0.05）。
责任编辑：姚红祥 |