〔摘要〕目的：研究不同龈下优势菌在种植材料表面的粘附特征。方法：通过将两种种植材料纯钛(TA₂)及钛-6铝-4钒合金(TC₄)试件分别与3种单一龈下优势菌S.s、F.n、P.g及其混合菌共同厌氧孵育，采用菌落形成单位(CFU)计数法量化测定培养试件表面的细菌粘附量，同时用扫描电镜观察材料表面形貌及细菌粘附情况。结果：TC₄表面的各单一细菌及混合菌粘附量均少于TA₂。结论：从微生态学角度而言，TC₄作为种植材料应当比TA₂更有利于种植体周的菌斑控制和种植的远期成功。

　　口腔微生物因素是造成种植体周围炎发病进而异致种植失败的要素之一^〔1〕，而微生物在种植材料表面的粘附是其定植甚至致病的首要步骤和前提条件^〔2〕。长期以来，此方面的体内外研究开展较少，并且由于实验设计、检测手段等方面的缺陷，造成实验结果差异较大，尤其是缺乏令人信服的客观量化资料。

　　本研究采用试验效率高、节省样本量的配伍组设计，独创性应用菌落形成单位计数法量化测定了不同培养时间段内，两种常用金属种植材料表面单一或混合龈下优势菌的粘附量，另外采用扫描电镜观察材料表面形貌及细菌的粘附情况，获取相关检测指标的量化资料及图象资料，旨在探索从微生态学角度评价种植材料的基本标准和方法。

　　1　材料和方法

　　1.1　材料及试件

　　两种种植材料商业纯钛(TA₂)及钛-6铝-4钒合金(TC₄)均系宝鸡有色金属研究院研制，并通过四川联大分析测试中心鉴定。两种材料试件各25个，分别为TA₂：15 mm×5.4 mm× 0.9 m m(表面积为198.22 mm²和TC₄:14.6 mm×6.0 mm×1.3 mm(表面积为228.46 mm²的长方形片状，经机械及化学抛光方法处理后，表面粗糙度达GB11级以上^〔3〕。经蒸馏水、超声振荡洗涤，高压蒸气灭菌后，保持清洁无菌备用。

　　1.2　实验菌株及实验菌液

　　血链球菌(Streptococcus sanguis,S.s)ATCC 10556，具核酸杆菌(Fusobacteriumnu cleatum,F.n)ATCC 10953及牙龈卟啉单胞菌(Porphyromanus gingivalis,P.g)ATCC 33 277,以上菌株均由华西医科大学口腔医学院卫生部生物医学工种重点实验室提供。各菌经厌氧复苏、纯化后制成吸光度(A)(α=540 nm，UV-1601型全自动分光光度计)为1.0的PBS菌悬液(菌量约为9×10¹¹ CFU/L)作为单一菌的实验菌液；根据预实验结果，将P.g、F.n、S.s 3种单一菌液按4∶3∶2的体积比混合后作为混合菌的实验菌液备用。

　　1.3　试件与细菌的孵育

　　两种材料与3种单一龈下优势菌及其混合菌间每种实验组合各备3支培养试管，每管内置入2个完全相同的试件及无菌BHI液体培养基5 ml，相应实验菌液0.5 ml，封好管口后连续厌氧培养〔37 ℃，φ(N₂)=80%，φ(CO₂)=10%，φ(H₂)=10%〕2、7、14 d后分别依次取出待测。

　　1.4　测试方法

　　孵育后取出试件，冲洗表面残留的培养液及非附着菌块，其中一个放入1 ml无菌PBS液中超声振荡洗涤1 min，洗涤液进行10倍系列稀释后，选择能准确计数的最佳稀释度样液10μl滴于BHI琼脂平板表面，均匀涂布开后厌氧培养48 h，进行菌落形成单位计数，并将计数结果换算成材料单位表面积内的细菌粘附量；对混合菌粘附量的测定根据平板上其各组成菌菌落的特征差异进行分别计数。

　　另一个试件则放入2.4 mol/L戊二醛液中固定3 h，经乙醇逐级脱水，自然干燥后作扫描电镜(J840A，Jeol，Japan)观察。

　　1.5　统计分析方法

　　采用PEMS统计软件包(第2版)对于细菌粘附量数据进行方差分析(ANOVA)及Newman-Keuls法检验组间差异，对混合菌中各组成菌构成比资料采用χ²检验比较分析。

　　2　结　果

　　2.1　材料表面细菌粘附量的CFU计数(结果见表1、2)。

表1　单一菌培养环境中的试件表面细菌粘附量测定结果　(×10⁷ CFU/L)

责任编辑：姚红祥