摘　要：目的:研究钛种植体周结缔组织中多糖-蛋白复合物在骨愈合过程中的变化规律及可能的作用机制。方法:采用爱尔蓝及生物素标记的植物血凝素方法对兔下颌钛种植体周围组织中的多糖-蛋白复合物及糖基进行观察。结果:钛种植体周结缔组织膜、新生骨基质及成骨细胞中此物质的含量较高。结论:多糖-蛋白复合物在钛种植体形成骨附着及维持钛的生物相容性方面可能具有重要作用,并推测其与骨代谢活性密切相关。

　　钛是一种具有良好生物相容性的牙种植材料，被广泛应用于临床，其生物相容性的基础在于它能与周围骨组织形成紧密的附着。近年来研究表明，多糖-蛋白复合物（polysaccharide-protein complex）与骨愈合的过程及病理改变均有密切关系，多糖-蛋白复合物在种植体表面的吸附，很可能是种植体周围组织发生的最早期反应^［1,2］，人为削弱此吸附，最终会导致骨附着强度的降低。有学者发现，在种植体骨愈合的早期，其龈沟液内多糖-蛋白复合物水平升高，形成骨附着后，成功种植体龈沟液多糖-蛋白复合物水平下降，而失败者则升高^［3］。这些初步的研究结果提示，作为“异己”的钛种植体无论在与周围组织相容或发生松动的过程中，多糖-蛋白复合物均可能发挥着重要作用。但目前，对此问题的研究尚缺乏肯定的证据。

　　本文通过研究兔下颌钛种植体周多糖-蛋白复合物及糖基在骨愈合中的分布及相对含量的动态变化，探讨可能的作用机制，为临床种植修复失败的病理研究提供实验依据和基础资料。

　　1　材料和方法

　　1.1　材料

　　商业纯钛种植体（cpTi，宝鸡有色金属研究所），长4 mm，直径3 mm，圆柱状，表面光滑；健康新西兰兔12只,雄性,6月龄，体重1.5～2.0 kg;主要染色液有:8 GX爱尔蓝染液（alcian blue，AB），过碘酸西夫试剂（periodic acid-schiff,PAS），刀豆蛋白（concanavalin ensiformis，Con A） 2.5 μg/ml，花生凝集素（arachis hypogaea，PNA）10 μg/ml，腰子豆凝集素（phaseolus vulgaris，PHA-E）25 μg/ml，麦胚凝集素（triticum vulgaris，WGA）10 μg/ml，tetragonolobus purpurea，WPL10 μg/ml。

　　1.2　实验方法

　　在3％戊巴比妥钠溶液腹腔全麻(35～40 mg/kg体重）下，拔除双侧下颌第一前磨牙，清理拔牙窝，各埋入1颗cpTi种植体，使其最高点位于牙槽骨嵴下2 mm处，严密缝合创面，术后3 d肌注庆大霉素（80万u/d）抗感染。此后分别于不同实验程期(1周，1月,6月）处死动物取样。

　　所有标本立即放入10％福尔马林溶液固定2～3周，再经10％EDTA（0.1 mol/L Tris/HCl缓冲液配制，pH7.0）脱钙8周后，按常规脱水，包埋，切片，进行下述染色。

　　1.2.1　爱尔蓝及过碘酸-西夫试剂染色法 染色结果可显示并鉴别各种不同性质的蛋白多糖（PG)的分布及相对含量。PAS红色显示中性糖蛋白；pH 2.5 AB蓝色显示酸性PG；pH 1.0 AB蓝色显示硫酸化PG;0.06 mol/L MgCl₂AB蓝色显示酸性PG；0.3 mol/L MgCl₂ AB蓝色显示硫酸化PG；0.5 mol/L MgCl₂ AB蓝色显示强硫酸PG。

　　1.2.2　植物血凝素糖基染色法（Lectin法) 棕黄色显示阳性反应：Con A阳性显示葡萄糖基（glucose，Glc）；PNA阳性显示半乳糖基（galactose，Gal）；WGA阳性显示乙酰氨基葡萄糖基（N-acetylglucosamine,GlcNAc）；PHA-E阳性显示乙酸氨基半乳糖基（N-acetylgalactosamine，GalNAc）；WPL阳性显示岩藻糖基（fucose，Fuc）。根据不同方法所显示不同颜色深浅，将染色程度分为六级：强阳性，次强阳性，阳性，+弱阳性，±可疑，-阴性。

　　2　结 果

　　2.1　组织学观察结果

　　正常牙周膜由致密而排列有序的胶原纤维束及其间丰富的成纤维细胞、神经、血管组成，固有牙槽骨内骨质致密，骨陷窝较多，分布规整。钛种植体植入1周，其与固有牙槽骨间可见大量结缔组织，近种植体处较致密，纤维平行排列，形成结缔组织膜。沿固有牙槽骨边缘，可见分支状新生骨组织向种植体周结缔组织中增生，新骨基质着色稍浅，周围可见立方状成骨细胞，也可见成骨细胞埋在基质中，胞核较大，可见胞浆。成骨活跃处，毛细血管丰富，部分固有牙槽骨周可见破骨细胞。

责任编辑：姚红祥