2.3　PG－LPS的鲎试剂检测结果
　　该实验证实，自制PG－LPS能使鲎细胞溶解物起凝胶反应，说明其具有较为典型的细菌内毒素活性，其活力约为1ug=400EU。
2.4　光镜观察结果
　　对照组成纤维细胞在实验开始不久就向金属边缘移行生长，逐渐与边缘附着，开始时是个别细胞呈垂直方向附着，逐渐形成丛状，并集合成束。由斑点、稀疏、不连续的折光点逐渐变得致密、连续，且范围逐渐扩大变宽。
　　实验组在实验早期一直未见成纤维细胞向金属边缘移行生长，也未见典型的垂直束状附着，在实验第2天时才见少数点状附着，范围较少，密度稀疏，轻轻移动培养瓶，则有许多细胞悬浮在培养液中。
2.5　PG－LPS对成纤维细胞附着影响的定量分析结果
　　对培养24、48、72、96小时的两组细胞的每视野附着细胞均数定量分析，结果发现实验组每视野附着细胞均数明显低于对照组。对照组成纤维细胞在24～48小时期间表现为每视野附着细胞均数增加明显，但实验组细胞无显著变化。结果如图2所示。

图2　BP－LPS对成纤维细胞附着的影响的定量分析

2.6　扫描电子显微镜观察结果
　　在扫描电子显微镜下发现对照组玻片及纯钛金属表面均有成纤维细胞生长，形态良好，呈扁平状，细胞伸出许多被称为丝状伪足（filopodia)的胞浆突触，粘附在材料表面，从而将细胞锚定在材料上，见图3，5。而实验组玻片及纯钛金属表面细胞呈圆形，细胞缩小成团(aggregate to from masses),未发现丝状伪足，见图4，6。

图3　对照组成纤维细胞在玻片表面生长情况。细胞
呈较典型的扁平多角形，并伸出许多细胞浆突触

图4　实验组成纤维细胞在玻片表面生长情况
细胞缩小成圆形，不见细胞突触

图5　对照组成纤维细胞在纯钛表面生长情况
细胞有许多突触伸出

图6　实验组成纤维细胞在纯钛表面生长情况
细胞皱缩成团，无细胞突触

3　讨论

3.1　PG－LPS对成纤维细胞附着的影响
　　本实验发现，在培养液中不含PG－LPS的空白对照组，成纤维细胞能在纯钛表面良好生长，细胞呈较典型的扁平多角形，细胞伸出许多胞浆突触（cytoplasmic projections)粘附在钛表面，将细胞锚定在材料上。而在培养液中含PG－LPS的实验组，纯钛表面的成纤维细胞缩小成团，无胞浆突触。Hunter等[5]研究发现，细胞附着主要通过细胞表面的灶性粘附斑(focal adhesive plaque)与材料相联结，从而达到细胞的附着。他们通过扫描电子显微镜观察细胞形态，同时结合间接免疫法测定灶性粘附斑，以了解其位置与数目，结果发现，在材料表面扁平而多突触的细胞其灶性粘附斑数目明显多于圆形而无突触的细胞。鉴于上述理论，说明含PG－LPS的实验组成纤维细胞其附着力低于不含PG－LPS的空白组。
　　另外,实验发现在培养液中加入PG－LPS后，对成纤维细胞在钛表面趋动附着的功能有干扰作用，使成纤维细胞向钛边缘移行生长开始的时间延缓，典型的垂直方式附着消失，且附着的范围变小，呈点状、稀疏、不连续，并且含PG－LPS实验组的每视野附着细胞均数下降，低于空白对照组，所有这些都说明，PG－LPS具有抑制成纤维细胞在钛表面附着的作用。
　　细菌LPS抑制成纤维细胞附着的机理主要有两个方面[6]:(1)由于细菌LPS使部分敏感的成纤维细胞中毒死亡或生长繁殖受到抑制，使细胞数量减少。（2）由于成纤维细胞在趋动附着时细胞微管、微丝运动受阻。而这两方面因素又可能是由细菌LPS对成纤维细胞相同的毒害机理所引起。LPS做为一种脂多糖具有膜的亲和性，易于附着于细胞膜上，通过吞噬作用进入细胞，并与线粒体内膜上特异受体结合，使其完整性受到破坏，线粒体酶外逸，有氧氧化酶活性下降，有氧氧化受阻，ATP生成减少，使得DNA的合成受到抑制，从而影响其生长繁殖。同时由于ATP生成减少，形成细胞空泡和细胞变性，胞浆突触减少，细胞活力受到影响，最后导致细胞死亡。另一方面，由于ATP生成减少，使得细胞需耗能才能进行的微管、微丝运动受阻，从而抑制成纤维细胞的附着。

责任编辑：姚红祥