摘要 目的：探讨维甲酸对体外鼠磨牙牙胚冠部形态发生的影响。方法：采用RPMI 1640半固态培养基，根据成分不同，培养基分为三组：含枸橼醛的培养基、含枸橼醛和维甲酸的培养基以及空白对照。将16d胎龄的鼠胎下颌第一磨牙牙胚分别置于RPMI 1640无血清半固态培养基表面培养6d，每48h更换培养基1次。结果：在含枸橼醛的培养基和空白培养基，牙胚未形成正常的牙乳头尖，颈环上皮位置表浅；在含枸橼醛和维甲酸的培养基，牙胚形成正常的牙乳头尖，颈环上皮增殖明显。结论：维甲酸缺乏妨碍了牙胚冠部正常形态的发生。
维甲酸是维生素A在体内代谢的主要产物，是胚胎发育不可缺少的成分，与细胞增殖、分化以及组织形态发生有密切关系。牙齿发育异常是临床上常见的牙体疾病，与遗传、妊娠期间营养成分缺乏有关。本实验采用了小鼠磨牙牙胚体外培养模型，用枸橼醛阻断牙胚组织的内源性维甲酸合成，探讨维甲酸缺乏对牙胚冠部形态发生的影响。
1 材料和方法
本实验所用小鼠为湖北医学科学院提供的昆明小鼠。小鼠胎龄以交配后次日见到阴道栓的时间为0d。将胎龄为16d的昆明小鼠断颈处死，浸入750ml/L酒精中消毒15s。取胎鼠下颌骨，于解剖显微镜下分离下颌第一磨牙牙胚。所用培养基为RPMI?1640无血清半固态培养基，基本成分包括青霉素500U/L，链霉素50mg/L，维生素C 200mg/L，Hepes 20mmol/L，5g/L琼脂。根据培养基中枸橼醛(Sigma)和维甲酸(Sigma；全反式)的成分不同，将培养基分为3组：
①单纯枸橼醛(1μmol/L)
②枸橼醛(1μmol/L)＋维甲酸(5×10-7mol/L)
③空白
培养基制备：用乙醇将维甲酸稀释至5×10-4mol/L；用蒸馏水将枸橼醛稀释至1mmol/L。在相应培养液中分别加入适量的1mmol/L枸橼醛和5×10-4mol/L维甲酸，并预热至40℃左右，再与45℃的30g/L琼脂(Sigma)混合均匀，使相应培养基中含1μmol/L枸橼醛和5×10-7mol/L维甲酸。向培养液中加入琼脂之前，单纯枸橼醛组和空白组均加入相应体积的乙醇，使三组培养基中乙醇含量相同。
培养方法和标本制作：将分离的牙胚分别置于不同的培养基表面，于37℃、含50ml/L CO2恒温恒湿培养箱中培养2d后，更换无枸橼醛的培养基，培养基中其它成分不变，每48h更换培养基1次，共培养6d。培养结束后分别将牙胚置于Bourn\'s固定液中固定8h，PBS洗30min，再用含少量饱和碳酸锂溶液的700ml/L酒精洗涤，直至牙胚的黄颜色全部褪去。常规脱水，石蜡包埋。制5μm厚度连续切片，苏木素染色，显微镜观察。
2 结果
16d胎龄的鼠胎下颌第一磨牙牙胚处于帽状期晚期，成釉器分为三层：内釉上皮层、星网状层和外釉上皮层，颈环位置表浅，无明显的牙乳头尖形成(图1)。
图1 16d胎龄的鼠胎下颌第一磨牙牙胚培养开始前处于帽状期，内釉上皮与外釉上皮交汇形成颈环(l) (e:成釉器；p:牙乳头)
培养6d后，在含有相同成分的培养基上，牙胚形态相似；在含有不同成分的培养基上，牙胚形态均有明显差异。与培养开始之前相比，牙胚在空白培养基上形成明显的牙乳头尖，但颈环上皮的位置与培养前相比无明显变化(图2)。在含枸橼醛的培养基上，培养6d后牙胚虽有牙乳头尖形成，但不如空白组牙胚的牙乳头尖显著；颈环上皮的位置和空白组相似，与培养前相比无明显变化(图3)。在含枸橼醛和维甲酸的培养基上，牙胚培养6d后不仅形成高耸的牙乳头尖，颈环上皮也明显增殖，牙胚由帽状期发育至钟状期(图4)。
图2 培养6d后，在空白对照培养基上形成明显的牙乳头尖(↑所示)，但颈环上皮的位置与培养前比无明显变化 (e:成釉器)
图3 培养6d后，在含枸橼醛的培养基上牙胚虽有牙乳头尖(↑所示)形成，但形态不明显；颈环上皮的位置与培养前相似
(e：成釉器)
