摘要 目的: 比较和分析急性牙髓炎和牙齿开髓刺激后，牙髓组织中P物质（SP）、降钙素基因相关肽（CGRP）的变化。方法：利用免疫组织化学方法观察大鼠牙齿开髓后2h、4h和急性牙髓炎2h、4h组牙髓组织中SP、CGRP免疫阳性纤维的变化。结果：牙髓炎性及机械损伤性伤害刺激引起牙髓组织SP/CGRP免疫阳性纤维一致性变化。牙齿开髓及牙髓炎2h、4h组牙髓组织中SP、CGRP免疫阳性纤维减少。结论：两种刺激均引起牙髓组织内神经末梢释放SP、CGRP。
牙齿受到伤害性刺激后，一方面引起传入纤维兴奋，在中枢端释放神经递质及神经调质，引起痛觉传递过程。另一方面通过轴突反射，牙髓神经末梢向牙髓组织中大量释放SP、CGRP 等神经调节物质［1］，在外周组织中发挥生物学效能，参与伤害性感受、炎症、免疫等反应。曹志中［2］实验证实牙髓炎5h，牙髓组织内CGRP免疫阳性染色变得稀疏，SP免疫阳性纤维增多，我们将进一步观察并比较牙髓炎和机械损伤状况下牙髓组织中SP和CGRP免疫阳性纤维的变化，分析牙髓炎和机械损伤性伤害刺激时，牙髓组织中SP、CGRP 的变化及可能作用。
1 材料和方法
实验用雄性SD大鼠，体重165～230g。分5个实验组：①正常大鼠(n=4)，②开髓2h组(n=4)，③开髓4h组(n=4)，④牙髓炎2h组(n=4)，⑤牙髓炎4h组(n=4)。4g/L戊巴比妥钠1ml/100g腹腔注射。待动物麻醉后，实验组大鼠第一磨牙面开髓至点状露髓，探针搔刮穿髓点3～4次。炎症组大鼠封1%角叉菜胶2h或4h。开髓组封生理盐水1h、2h或4h。待动物到规定时间点后，在深度麻醉状态下，经心脏灌注40g/L多聚甲醛500ml，1.5h。固定结束后取实验侧上颌骨入100g/L EDTA中，4℃脱钙10d。将脱钙的上颌骨入200g/L蔗糖中，4℃ 24h。恒冷箱切片机切片，片厚30μm，收集到0.01mol/L PBS中浸泡，行ABC免疫组织化学染色。同时取一套切片行一抗抗体替代免疫组织化学染色。
2 结果
2.1 正常大鼠牙髓内SP/CGRP免疫阳性纤维的形态
正常大鼠第一磨牙牙髓组织中含有丰富的CGRP免疫阳性纤维。粗大的神经纤维束由根尖孔进入，经根髓直达冠髓，在冠髓顶部成牙本质细胞下层，纤维长轴与冠髓顶近平行排列成网状，大量CGRP免疫阳性纤维从网状结构中分出垂直进入成牙本质细胞层及牙本质内层。牙颈部和牙根部较少见到成牙本质细胞下CGRP免疫阳性纤维的网状分布。牙髓组织中SP免疫阳性纤维的数量明显少于CGRP免疫阳性纤维，根髓内SP免疫阳性纤维呈束状进入冠髓。形成不典型的成牙本质细胞下神经丛 (图1)。
图1 正常大鼠牙髓组织中SP、CGRP免疫阳性纤维的分布 (×60)
A：正常大鼠冠髓内成牙本质细胞下层CGRP免疫阳性纤维网和成牙本质细胞层、牙本质小管内CGRP免疫阳性纤维
B：正常大鼠冠髓内SP免疫阳性纤维 C：正常大鼠根髓内SP免疫阳性纤维
2.2 牙髓炎性及机械损伤性刺激引起牙髓组织SP/CGRP免疫阳性纤维的变化
牙髓炎性及机械损伤性伤害刺激引起牙髓组织SP/CGRP免疫阳性纤维一致性变化。牙齿开髓及牙髓炎2h组牙髓组织中CGRP阳性纤维少见。正常的成牙本质细胞下CGRP免疫阳性纤维网状结构消失。牙本质小管内极少见 CGRP免疫阳性纤维。牙髓组织中SP免疫阳性纤维更为少见。牙齿开髓4h组与2h组无明显差异，但图像处理的SP/CGRP免疫阳性纤维的灰度值高于2h组，并可见轻度血管扩张。牙髓炎症4 h组可见稀疏的SP围绕在极度扩张的血管周围(图2)。
图2 牙髓伤害性刺激对牙髓组织SP、CGRP免疫阳性纤维数量的影响(×60)
A：牙齿开髓2h组，冠髓内CGRP免疫阳性纤维少见 B：牙髓炎4h组，冠髓内SP免疫阳性纤维围绕在血管周围
C：牙髓炎4h组，根髓内SP免疫阳性纤维沿血管走行
3 讨论
3.1 牙齿伤害性刺激对牙髓神经释放SP、CGRP的影响
研究证实［3］，伤害性刺激对牙髓组织中SP/CGRP免疫阳性纤维表达呈双相性影响：轻度牙髓损伤引起CGRP免疫阳性染色增强，重度牙髓损伤使CGRP免疫阳性染色消失或减弱。急性炎症早期SP/CGRP免疫阳性纤维消失，急性炎症后期、慢性炎症和长期损伤引起牙髓组织SP/CGRP免疫阳性纤维增强。我们观察到无论是牙齿开髓还是牙髓炎的早期，牙髓组织中CGRP免疫阳性纤维及SP免疫阳性纤维均明显降低，结合他人的实验我们认为牙髓组织中SP/CGRP免疫阳性纤维的变化与刺激后的时间点有关。在我们另外的实验中发现，相同的牙齿伤害性刺激引起三叉神经节中PPTA mRNA及CGRP mRNA表达增强。说明牙髓炎性及机械损伤性刺激可以激活牙髓神经的传出功能，牙髓神经释放SP和CGRP 增多，使牙髓组织中CGRP免疫阳性纤维及SP免疫阳性纤维减少。
