【摘 要】 目的：建立修复性牙本质形成的动物实 验模型，观察修复性牙本质形成的组织形态学 特征。方法：在Wistar大鼠第一磨牙近中面制备窝洞，分别观察3、 15、30d，标本切片，HE染色，显微镜下观察。结果：术后3d未见 修复性牙本质形成。15d后可见修复性牙本质形 成，并可见骨样牙本质。窝洞下原代成牙本质细胞由新分化的成牙本质细胞样细胞取代。30 d后，修复性牙本质明显增加。新分化的成牙本质细胞样细胞发生极化。结论： 大鼠模型是研究修复性牙本质形成的一个良好模型。
【关键词】 修复性牙本质; 牙本质形成; 成牙本质细胞; 大鼠
牙本质-牙髓复合体受到口腔环境中诸如龋损、机械、化学、 损伤等多种刺激后发生自身修 复过程，形成第三期牙本质［1～3］。Smith等将第三期牙本质描述为在受损伤刺激 部位下的牙本质-牙髓交界处新生成的牙本质［4］。为了解第三期牙本质形成的 过程和机制 ，许多学者采用一些动物模型进行研究。Magloire［5］、Stanley［6］、Bjo rndal［7］ 等直接观察龋损下的牙髓修复过程和成牙本质细胞反应。Tziafas［8，9］、Nakashi ma［10，11］、Rutherford［12，13］、Hu［14］等采用在动物牙髓内 覆盖或植入有诱导活性的生物材料的方法，Cox［15］、D\'Souza［16］、Ohsh ima［17］、Smith［18］、Kitamura［19］等采用在动物磨牙上制备窝 洞的方法。
牙髓修复的细胞学机制，是牙髓内具有分化潜能的细胞，在信号分子的诱导下发生分化 并 取代受损的原代成牙本质细胞。这个分化过程涉及非常复杂的细胞-细胞外基质的相互作用 。体内实验有助于揭示牙髓修复的机制。本研究目的拟在大鼠磨牙上建立修复性牙本质形成 的动物模型，并进行组织形态学观察。
1 材料和方法
1.1 手术过程
18只Wistar大白鼠（湖北省医科院），体重150～250g。50g/L苯巴比妥钠（sodium pent obarbital）腹腔内注射麻醉（30 mg/kg）。分别在上、下颌第一磨牙近中面制 备单面洞。窝洞深度为牙本质厚度的1/2。窝洞未行充填。每只动物左上第一磨牙未备洞， 作为空白对照。所有窝洞制备由一人完成。分别在术后第3、15和30天处死动物。上述 手术过程和观察时间与D\'Souza［16］ 、Ohshima［17］等基本一致。
1.2 标本制备
动物处死后迅速分离上、下颌骨，立即置于新配制的40g/L多聚甲醛内，4℃下固定24～48h 。 100g/L EDTA脱钙3周。系列乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，5μm连续切片，方向为矢 状，每一切片上包括第一、二、三磨牙。切片铺于多聚赖氨酸包被的玻片上。4℃下保存。
1.3 染色与观察
每组标本中选择1～2张切片进行HE染色。染色后树脂封片，显微镜下观察。
2 结果
窝洞预备3d后，修复性牙本质未形成。窝洞下的前期牙本质厚度略增加。成牙本质细胞排 列整齐，牙髓内毛细血管轻度充血（图1）。高倍镜下观察，成牙本质细胞形态基本正常， 但细胞之间出现间隙，成牙本质细胞与前期牙本质之间也出现间隙，提示细胞可能出现损伤 （图2）。
15d后可观察到修复性牙本质的形成（图3）。高倍镜下可见新形成的牙本质致密，无管状 结构。可分辨前期牙本质和包裹细胞的骨样牙本质（图4）。窝洞下原代成牙本质细胞消失 ，由形态不规则的新分化的成牙本质细胞样细胞取代，排列不整齐，并已开始发生极化。细 胞之间的连接紧密。在成牙本质细胞样细胞下方，可见较致密的梭形牙髓细胞，毛细 血管扩张、充血。
30d后，修复性牙本质明显增加，髓腔狭窄（图5）。高倍镜下（图6），修复性牙本质出现 管状结构，但不如正常牙本质明显。新分化的成牙本质细胞样细胞排列明显整齐，大多数细 胞发生极化。细胞层下的毛细血管仍扩张。
图1 术后3d，HE染色 ×6
图2 术后3d，HE染色 ×60
