马卫东 徐凤艳 大连市口腔医院大连大学附属口腔医院
[目的]溶菌酶是广泛存在于动、植物及有机物体内的可作为杀菌剂的蛋白酶，它能够催化水解肽聚糖上的N—乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡萄糖之间的糖苷键，导致细菌细胞壁的裂解。尤其对革兰氏阳性细菌作用明显。我们已确定了柞蚕溶菌酶的cDNA和氨基酸序列。本项研究的目的是分析重组的柞蚕溶菌酶基因对口腔变形链球菌的作用。
[方法]毕赤酵
母表达系统用于柞蚕溶菌酶的表达及纯化。琼脂扩散法用于检测重组柞蚕溶菌酶对口腔变形链球菌的抗菌活性。
[结果]在毕赤酵母表达系统中表达的柞蚕溶菌酶能够分泌到胞外，并且被糖基化。抑菌圈结果显示重组柞蚕溶菌酶对变形链球菌有抑菌活性。
[结论]1 1.本研究建立了柞蚕溶菌酶的毕赤酵母表达系统。首次使用了柞蚕溶菌酶自身的信号肽序列，在毕赤酵母细胞中实现了柞蚕溶菌酶的分泌表达。蛋白质N端序列分析结果证实所表达的重组柞蚕溶菌酶N端氨基酸序列与预测的成熟柞蚕溶菌酶一致，表明柞蚕溶菌酶自身信号肽能够准确有效地将成熟柞蚕溶菌酶分泌到酵母细胞外。2．柞蚕溶菌酶在酵母菌中的表达是在0．5％甲醇诱导下，96小时达到高峰；纯化的重组柞蚕溶菌酶分子量约为20，000道尔顿；Endo H酶解纯化的重组柞蚕溶菌酶证实，柞蚕溶菌酶在酵母细胞翻译过程中有N—糖基化修饰发生。3．本研究采用琼脂扩散法初步分析了重组柞蚕溶菌酶对变形链球菌的作用，重组的柞蚕溶菌酶对变形链球菌具有抑制其生长的作用。
